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          人腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒使用說明書

          2010-10-13 [1652]

          藥品名稱:
          通用名:人腫瘤壞死因子β(TNF-β)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
          使用目的:
          本試劑盒用于測定人血清、血漿、或其它組織液中腫瘤壞死因子β(TNF-β)含量。
          實驗原理
          本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人腫瘤壞死因子β(TNF-β)水平。用純化的人腫瘤壞死因子β(TNF-β)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入腫瘤壞死因子β(TNF-β),再與HRP標記的TNF-β抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的人腫瘤壞死因子β呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人腫瘤壞死因子β(TNF-β)濃度。
          試劑盒組成

          1 20倍濃縮洗滌液 50ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
          2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品(270ng/L) 0.5ml×1瓶
          3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 2ml×1瓶
          4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
          5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 
          6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個


          標本要求
          1.標本采集后盡早進行實驗。
          2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
          3.可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
          操作步驟
          1.         標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為(180 ng/L,120ng/L ,60ng/L,30 ng/L,15 ng/L)。
          2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
          3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
          4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
          5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
          6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
          7.         溫育:操作同3。
          8.         洗滌:操作同5。
          9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
          10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn))。
          11.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
           
          計算
            以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
          注意事項
          1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
          2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
          3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
          4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
          5. 嚴格按說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準
          6.底物請避光保存。
          7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
          8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
          9.本試劑不同批號組分不得混用。
          10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
          檢測范圍:
          10ng/L -200 ng/L
          規(guī)格:
          96人份/盒
          保存條件及有效期
          1.試劑盒保存:;2-8℃。
          2.有效期:6個月
           
          ELISA試劑盒

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