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          ELISA試劑盒測(cè)定法測(cè)定抗體

          2016-09-05 [1972]

          ELISA試劑盒原理
          其基本原理可概括為:將特異的抗原-抗體免疫學(xué)反應(yīng)和酶學(xué)催化反應(yīng)相結(jié)合,以酶促反應(yīng)的放大作用來顯示初級(jí)免疫學(xué)反應(yīng)。因此,酶免疫技術(shù)一般均有兩部分組成,即一次或數(shù)次免疫學(xué)反應(yīng)和一次酶促反應(yīng)。抗原、抗體發(fā)生特異結(jié)合過程中,設(shè)法引入酶結(jié)合物,如酶標(biāo)記的抗抗體,然后加入酶的底物,在酶催化下生成有色產(chǎn)物,反映出被測(cè)定抗原或抗體的量。
          ELISA試劑盒操作流程:
          檢測(cè)抗體多用間接型elisa。以純化抗原包被載體,經(jīng)4℃,以無關(guān)蛋白封閉至少2小時(shí)以上,加入待測(cè)樣品,室溫孵育1小時(shí),洗滌干凈后加酶標(biāo)抗體,再經(jīng)室溫孵育、洗滌后,以底物顯色,顯色到一定程度終止反應(yīng),在酶標(biāo)儀上讀結(jié)果或以肉眼判斷。
          類型:elisa具體方法的類型繁多,試劑的標(biāo)準(zhǔn)化問題還未zui后解決,溫育的時(shí)間、溫度、洗滌液的種類及洗滌次數(shù)等都是影響測(cè)定的因素。但參考以上基本過程,無論怎樣變化,均離不開抗原-抗體反應(yīng)、酶標(biāo)抗體的免疫學(xué)反應(yīng)及酶催化作用。
          特點(diǎn):
          1、敏感性高,可檢出濃度在ug~mg/ml水平;
          2、特異性強(qiáng);
          3、重復(fù)性好;
          4、快速、簡(jiǎn)便、廉價(jià)。
          實(shí)驗(yàn)條件
          固相載體:可作為固相載體的物質(zhì)很多,如:纖維素、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚丙烯、交聯(lián)葡聚糖、玻璃、硅橡膠、瓊脂糖凝膠等。可以各種形式出現(xiàn);試管、微量反應(yīng)板凹孔、小珠.....。zui常用的是聚苯乙烯制品,其吸附性。固相包被的機(jī)制一般不外乎物理吸附和共價(jià)交聯(lián),
          封閉:以無關(guān)蛋白占據(jù)載體上未被包被的空隙,常用的封閉液是1%牛血清白蛋白或10%小牛血清。
          待測(cè)樣品:稀釋度要合適,濃度太大會(huì)發(fā)生非特異性吸附造成假陽性,過分稀釋會(huì)影響抗原-抗體之間的免疫學(xué)反應(yīng)。選擇zui適稀釋度,在實(shí)驗(yàn)體系中取光密度在1.0左右的稀釋度為宜。
          酶結(jié)合物:使用高質(zhì)量的酶結(jié)合物是elisa成功的關(guān)鍵。
          ELISA試劑盒注意事項(xiàng)
          酶聯(lián)免疫技術(shù)的試劑標(biāo)準(zhǔn)化問題尚未完*,溫育過程的時(shí)間、溫度、洗滌液的種類及洗滌次數(shù)都是影響zui后測(cè)定的因素。為使實(shí)驗(yàn)得到滿意的結(jié)果,在操作過程中應(yīng)作到
          1、每次試驗(yàn)都必須設(shè)陽性和陰性對(duì)照。
          2、封閉要*。
          3、洗滌要測(cè)定。

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