ELISA試劑盒測定法測定抗體

ELISA試劑盒原理
其基本原理可概括為：將特異的抗原-抗體免疫學反應和酶學催化反應相結合，以酶促反應的放大作用來顯示初級免疫學反應。因此，酶免疫技術一般均有兩部分組成，即一次或數(shù)次免疫學反應和一次酶促反應。抗原、抗體發(fā)生特異結合過程中，設法引入酶結合物，如酶標記的抗抗體，然后加入酶的底物，在酶催化下生成有色產(chǎn)物，反映出被測定抗原或抗體的量。
ELISA試劑盒操作流程：
檢測抗體多用間接型elisa。以純化抗原包被載體，經(jīng)4℃，以無關蛋白封閉至少2小時以上，加入待測樣品，室溫孵育1小時，洗滌干凈后加酶標抗體，再經(jīng)室溫孵育、洗滌后，以底物顯色，顯色到一定程度終止反應，在酶標儀上讀結果或以肉眼判斷。
類型：elisa具體方法的類型繁多，試劑的標準化問題還未zui后解決，溫育的時間、溫度、洗滌液的種類及洗滌次數(shù)等都是影響測定的因素。但參考以上基本過程，無論怎樣變化，均離不開抗原-抗體反應、酶標抗體的免疫學反應及酶催化作用。
特點：
1、敏感性高，可檢出濃度在ug~mg/ml水平；
2、特異性強；
3、重復性好；
4、快速、簡便、廉價。
實驗條件
固相載體：可作為固相載體的物質(zhì)很多，如：纖維素、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚丙烯、交聯(lián)葡聚糖、玻璃、硅橡膠、瓊脂糖凝膠等。可以各種形式出現(xiàn)；試管、微量反應板凹孔、小珠.....。zui常用的是聚苯乙烯制品，其吸附性。固相包被的機制一般不外乎物理吸附和共價交聯(lián)，
封閉：以無關蛋白占據(jù)載體上未被包被的空隙，常用的封閉液是1%牛血清白蛋白或10%小牛血清。
待測樣品：稀釋度要合適，濃度太大會發(fā)生非特異性吸附造成假陽性，過分稀釋會影響抗原-抗體之間的免疫學反應。選擇zui適稀釋度，在實驗體系中取光密度在1.0左右的稀釋度為宜。
酶結合物：使用高質(zhì)量的酶結合物是elisa成功的關鍵。
ELISA試劑盒注意事項
酶聯(lián)免疫技術的試劑標準化問題尚未完*，溫育過程的時間、溫度、洗滌液的種類及洗滌次數(shù)都是影響zui后測定的因素。為使實驗得到滿意的結果，在操作過程中應作到
1、每次試驗都必須設陽性和陰性對照。
2、封閉要*。
3、洗滌要測定。