那些我們徹夜未眠搞不懂的ELISA試劑盒知識

ELISA試劑盒近日網上關于的討論帖子很多，今天也發表一下自己的一些看法，對ELISA的見解有不對的地方，希望指正或者直接拍磚。其實很多客戶上當受騙都和網絡有關系，如果你不是在網上找試劑，而是認真看看帖子，可能會改變你原來的選擇。
ELISA試劑盒首先，談一下市場。首先RnD和Bender等一些的還是很值得信賴的，也得到了市場的認可，特別是RnD的盒子，我們賣的很好，就是價格好貴，經費不是很充裕的實驗室難消費的起。
第二，談一下如何靈活應用ELISA這個檢測方法以及如何去挑選ELISA試劑盒。ELISA這個方法的原理，大家都很清楚，網上的資料一大堆。可真正用起來的時候，有時候就有點犯糊涂，我談一下自己的理解。
1、對于一些小分子的檢測，比如前列腺素、糖皮質激素的檢測，我的理解是要用競爭法ELISA去檢測，也要購買采用這個方法的盒子。一般細胞因子的檢測，都是采用常規的夾心法ELISA檢測，因為因子分子量比較大，一般10幾個KD左右，很容易找到兩個或者多個抗原表位。而小分子很難找到兩個不同的表位，也就決定了包被抗體和檢測抗體無法同時結合小分子并固相化。解決方案就是酶標板上包被二抗，每個孔加入一定量的酶標的小分子，然后加樣品，再加不帶標記的檢測抗體，顯色底物。樣品的目的小分子的含量越高，吸光度越低。
2、對于胰島素的檢測，我還是推薦millpore 旗下LInco公司的檢測試劑盒，不管是放免還是ELISA，據說權在他們手中。
3、有些客戶會用OVA（卵清蛋白）做一些哮喘，過敏性腸炎的模型，后來會檢測粘膜特異性的sIgA以及血清里面IgG，IgE等指標。當客戶向我咨詢購買這幾個指標的盒子的時候，我很肯定地說這些指標的檢測要你自己特制，不會有商品化的盒子出售的。當baidu，google一下，頁面出來大量的商品化的盒子，千篇一律的說明書時候，我真的是蒙了，我懷疑自己跟不上時代了。我這里不去評論這些盒子的真假，我仍然建議做這些檢測指標的戰友，選擇sigma公司V級別的OVA，然后用這個來造模，自己包板摸條件，用OD值來比較抗體含量的變化。
4、ELISA檢測方法簡單，靈敏度高，我個人覺得ELISA檢測血清或者培養上清的細胞因子、胰島素、激素等分泌型的小分子蛋白的定量檢測；病原體抗原的定性與定量；評估自己制備的血清抗體的效價等。好多客戶有個誤區，拿來一個指標就想當然地嘗試用ELISA去檢測，我還是建議多動腦，該檢測活性的檢測活性，該做western的做western。
5、我主要的客戶是醫學院校，做實驗面向的種屬主要是人，大鼠和小鼠，現在市面上雞、牛、馬、羊、兔各種指標的盒子都有售，真不知道這些抗體是怎么來的。據我所了解，這些炎癥指標還是有很大種屬特異性的。
ELISA試劑盒NO的檢測，一般都是采用經典的Greiss法，現在市場上竟然有NO ，真是徹夜未眠也搞不明白。