研域（上海）教您細胞是怎么轉染的

 轉染 ，是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。跟著基因與蛋白功用研討的深化，轉染現在已成為試驗室工作中常常觸及的底子方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微打針和基因槍歸于通過物理方法將基因導入細胞的*；化學介導方法許多，如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術；生物介導方法，有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。
 志向細胞轉染方法，應該具有轉染功率高、細胞毒性小等長處。病毒介導的轉染技術，是現在轉染功率的方法，同時具有細胞毒性很低的優勢。但是，病毒轉染方法的預備程序雜亂，常常對細胞類型有很強的選擇性，在一般試驗室中很難廣泛。其它物理和化學介導的轉染方法，則各有其特色。
需求指出的一點，不管選用哪種轉染技術，要取得*優的轉染效果，或許都需求對轉染條件進行優化。影響轉染功率的要素許多，從細胞類型、細胞培養條件和細胞生長情況，到轉染方法的操作細節，都需求考慮。
一、細胞傳代
1. 試驗預備：200ul/1mlTip頭各一盒（以上物品均需高壓滅菌），酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養皿，離心管。
2. 棄掉培養皿中的培養基，用1ml的PBS溶液洗刷兩次。
3. 用Tip頭參與1ml Trypsin液，消化1分鐘（37℃，5%CO2 ）。用手輕拍培養瓶壁，查詢到細胞*從壁上脫落下來中止。
4. 參與1ml的含血清培養基中止反應。
5. 用Tip頭屢次吹吸，使細胞*分散開。
6. 將培養液裝入離心管中，1000rpm離心5min。
7. 用培養液重懸細胞，細胞計數后選擇0.8X106個細胞參與一個35mm培養皿。
8. 將適合體積*培養液參與離心管中，混勻細胞后悄然參與培養皿中，使其均勻分布。
9. 將培養皿轉入CO2培養箱中培養，第二天轉染。
二、細胞轉染
1. 轉染試劑的預備
① 將400ul去核酸酶水參與管中，轟動10秒鐘，溶解脂狀物。
② 轟動后將試劑放在－20攝氏度保存，運用前還需轟動。
2. 選擇適合的混合比例（1：1－1：2/脂質體體積：DNA質量）來轉染細胞。在一個轉染管中參與適合體積的無血清培養基。參與適合質量的MyoD或許EGFP的DNA，轟動后在參與適合體積的轉染試劑，再次轟動。
3. 將混合液在室溫放置10―15分鐘。
4. 吸去培養板中的培養基，用PBS或許無血清培養基清洗一次。
5. 參與混合液，將細胞放回培養箱中培養一個小時。
6. 屆時后，根據細胞品種決議是否移除混合液，之后參與*培養基繼續培養24－48小時。
三、第2次細胞傳代
1. 在轉染后24小時，查詢試驗效果并記載綠色熒光蛋白表達情況。
2. 再次進行細胞傳代，按照免疫染色適合的密度0.8X105個細胞/35mm培養皿將細胞從頭轉入培養皿中。
3. 在正常條件下培養24小時后按照染色要求條件固定。