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          試劑盒售后解析ELISA測(cè)定結(jié)果

          2020-10-15 [1707]

          今早,我公司吳收到由沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)朱老師發(fā)來(lái)的會(huì)話。朱老師在2015年連續(xù)購(gòu)買了6次ELISA試劑盒,上周,朱老師我司技術(shù)說(shuō)想要試試自己配的試劑盒,看看檢測(cè)效果。在朱老師給吳的會(huì)話中表示:“我的這個(gè)檢測(cè)結(jié)果不理想,不知道是哪里出了問(wèn)題。幫我看下是什么原因可以嗎?”我公司試劑盒售后客服吳說(shuō)可以,并為朱老師安排技術(shù)解析Elisa試劑盒測(cè)定結(jié)果。

              朱老師的主要問(wèn)題是:我自己合成8個(gè)氨基酸的抗原短肽,和BSA耦連后免疫動(dòng)物,1個(gè)月后用ELISA測(cè)定血清中針對(duì)抗原短肽的抗體滴度,具體步驟:用碳酸緩沖液溶解抗原短肽后包板,4度冰箱18小時(shí),再用1%OVA37度封閉2小時(shí),洗板3次。待測(cè)血清用10%小牛血清倍比稀釋,37度溫育1小時(shí),洗板3次,加入二抗,37度溫育40分鐘,洗板3次,加TMB顯色,結(jié)果比較詭異,陰性對(duì)照也顯色了,且OD值和陽(yáng)性差別不大。是什么原因呢?是洗板的問(wèn)題嗎? 

              十分鐘后,技術(shù)員給朱老師去解答。可以根據(jù)這幾個(gè)方面分析: 

          1.洗板是否串孔,如串孔的話可能造成污染;你一抗、二抗每次洗板時(shí)洗5遍以上。

          2.封閉液的問(wèn)題,你說(shuō)陰性對(duì)照也顯色了,那主要的問(wèn)題應(yīng)該是封閉,應(yīng)重新考慮用OVA封閉是否適合,如果OVA封閉效果不好的話可以選擇其他的封閉液。封閉液的選擇園子里有很多相關(guān)的帖,你搜一下看看。

          3.建議ELISA試劑盒包被在37度兩小時(shí),這樣的效果可能會(huì)好一些。

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