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          人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA 試劑盒的操作步驟

          2022-08-08 [1450]

          人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA 試劑盒的操作步驟

          背景[1-3]

          人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA試劑盒用于測定血清,血漿及相關液體樣本中胃蛋白酶原A(PG-A)的含量。


          人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA試劑盒是采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(elisa)的原理。往預先包被人胃蛋白酶原A(PG-A)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的。顏色的深淺和樣品中的人胃蛋白酶原A(PG-A)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。



          人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA試劑盒

          標本要求

          1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。

          2.血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

          3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。


          操作步驟

          1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

          2.設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

          3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

          4.除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

          5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

          6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

          7.每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。


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