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          研域(上海)細(xì)胞系操作過(guò)程的方法檢測(cè)靈敏度

          2023-04-23 [1283]

          細(xì)胞系是指直接從機(jī)體取出的組織或細(xì)胞獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行培養(yǎng)的細(xì)胞。這里的組織主要指:組織器官、外周血及胚胎等。由于細(xì)胞系生長(zhǎng)緩慢,繁殖一定的代數(shù)停止生長(zhǎng)。所以一般認(rèn)為:培養(yǎng)的原代的1代和傳代到10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為細(xì)胞系培養(yǎng)??偨Y(jié)了細(xì)胞系的提取的整個(gè)操作過(guò)程,一起來(lái)看看吧!

          細(xì)胞系的提取的整個(gè)操作過(guò)程:

          1.整個(gè)操作要在潔凈通風(fēng)的超凈臺(tái)下進(jìn)行,所有的器材要高壓消毒。

          2.根據(jù)BALB/c小鼠的體重,用10ml/kg3%濃度的麻醉;將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內(nèi),這一步不僅可以消毒,也可以讓小鼠體毛浸濕,后續(xù)剃去皮毛的時(shí)候不會(huì)沾到剪刀或組織上。

          3.用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟,裝有PBS的注射器插入心尖,同時(shí)在右心耳處剪開(kāi)一個(gè)小口,緩慢推動(dòng)注射器,隨著心臟的跳動(dòng),將體內(nèi)的血液沖洗出來(lái)。

          4.取出小鼠的肺部組織,細(xì)胞系將肺組織切成小米粒樣的大小,置于預(yù)冷的HBSS中反復(fù)沖洗幾次。

          5.將小米粒大小的肺組織置于培養(yǎng)瓶中(培養(yǎng)瓶前一天用1%明膠溶液包被培養(yǎng)面,4度過(guò)夜,小鼠處理前,將培養(yǎng)瓶放置培養(yǎng)箱中,使其溫度恢復(fù)至37度),置于培養(yǎng)箱37度的環(huán)境下,消化4個(gè)小時(shí)。

          6.消化4小時(shí)后,加入RPMI1640培養(yǎng)基(有10%血清、1%雙抗、1%內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子)10ml(添加培養(yǎng)基,可以是正常培養(yǎng)時(shí)的2倍量),繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)(繼續(xù)培養(yǎng)的時(shí)間可根據(jù)細(xì)胞貼壁情況適當(dāng)調(diào)整)。

          7.24小時(shí)后,取出肺組織,鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),換液。

          8.細(xì)胞系的提取和培養(yǎng)是很慢的過(guò)程,一般需等到24小時(shí)后,才能在鏡下看到些許細(xì)胞群,一周到兩周后才會(huì)看到鵝卵石樣的排列情況。

          9.細(xì)胞系2-3天換液一次,因?yàn)閮?nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)形成單層時(shí),會(huì)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象。所以,內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)接近單層時(shí)就可以傳代了,不要等到長(zhǎng)得非常滿。

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