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          RNA提取-注意事項

          2011-09-22 [2772]

          1.實驗室應專門辟出RNA操作區,離心機,移液器,試劑等均應。RNA操作區應保持清潔,并定期進行除菌。

          2.在超凈臺中按照細胞培養的要求進行操作,可以有效避免操作中引起的RNA酶污染。

          3.操作過程中應始終戴一次性橡膠手套,并經常更換,以防止手、臂上的細菌和真菌以及人體自身分泌的RNA酶帶到試管或污染用具,盡避免使用一次性塑料手套。塑料手套不但常常造成操作不便,且塑料手套的多出部分常常在器具的RNase污染處和RNase-free處傳遞RNase,擴大污染。

          4.避免在操作中說話聊天。也可以戴口罩以防止引起RNA酶污染。

          5.盡量使用一次性的塑料制品,盡量避免共用器具如濾紙,離心管,槍頭等,以防交叉污染。例如,從事RNA探針工作的研究者經常使用RNase H,T1等,在操作過程中極有可能造成移液器、離心機等的污染。而這些污染了的器具是RNA操作的大敵。

          6.關于一次性塑料制品,建議使用廠家供應的出廠前已經滅菌的槍頭和離心管等。多數廠家供應的無菌塑料制品很少有RNA酶污染,買來后可直接用于RNA操作。許多研究者用DEPC等處理的塑料制品,往往由于二次污染而帶有RNA酶,從而導致實驗失敗。

          7.配制溶液用的酒精、異丙醇、Tris等應采用未開封的新瓶。

          8.所有舊塑料制品都必須用0.5M的NaOH處理10分鐘,用雙蒸水*沖洗,DEPC-H20浸泡過夜后滅菌。

          9.無法用DEPC處理的用具可用氯仿擦拭若干次,這樣通常可以消除RNA酶的活性。但氯仿會溶解某些塑料制品,應當注意。

          10.如果需要遠距離運輸或長期儲藏RNA樣品,建議先將標本(細胞、組織)保存在RNA保存液中。

           

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