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          ABC-ELISA材料和方法

          2011-10-12 [1781]

          BAS酶聯免疫吸附試驗材料和方法
          (以篩選抗空腸彎曲菌共同抗原的單克隆抗體為例)

          1 材料
          (1) 空腸彎曲菌共同抗原提取物,自制。 BAS酶聯免疫吸附試驗材料和方法
          (2) 生物素化羊抗鼠IgG(BSAMG),衛生部上海生物制品所。
          (3) ABC試劑,衛生部上海生物制品所。如ABC試劑需自己配制,可按說明要求,將親和素與酶標生物素按一定比例混合,置37℃孵育30min后使用。
          (4) 被檢雜交瘤培養物上清液。
          (5) 其他試劑及器材同常規ELISA法。 BAS酶聯免疫吸附試驗材料和方法

          2 方法ABCELISA間接法程序
          (1) 用包被液對空腸彎曲菌共同抗原提取物作適當稀釋(1∶16),加入反應孔中,每孔01ml,置4℃包被過夜或37℃1~2h。
          (2) 用洗滌液洗滌2次,每次1min,瀝干。
          (3) 加入雜交瘤培養物上清液,每孔01ml。同時作BALB/C小鼠免疫血清(陽性)及正常血清和培養液(陰性)對照,置37℃1~2h。 BAS酶聯免疫吸附試驗材料和方法
          (4) 洗滌3次,方法同上。
          (5) 用保溫液對生物素化羊抗鼠IgG作適當稀釋(1∶400~1∶1000),加入反應孔中,每孔01ml。置37℃孵育1h。
          (6) 洗滌3次,方法同上。
          (7) 用ABC稀釋液或保溫液對ABC試劑作適當稀釋(1∶100),加入反應孔中,每孔01ml。置37℃孵育30min。 BAS酶聯免疫吸附試驗材料和方法
          (8) 洗滌3次,方法同上。
          (9) 加入鄰苯二胺底物溶液,每孔01ml,置暗盒內室溫顯色適當時間(30min)。
          (10) 加入2mol/L H2SO4,每孔005ml,終止反應。用酶聯檢測儀檢測結果,并記錄其OD值。

          3 結果判定以P/N≥2為陽性,或根據自定標準判定。
          BAS酶聯免疫吸附試驗材料和方法
          4 注意事項
          1 ABCELISA中各要素的*反應條件需經篩選后確定,不能照搬常規ELISA的反應條件。
          2 ABCELISA對抗原和抗體(或免疫血清)的質量要求高,否則可造成較高的本底或背景顯色。
           

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