首頁 > 技術文章 > PCR-ELISA法診斷禽流感

          PCR-ELISA法診斷禽流感

          2011-11-03 [1926]

          PCR-ELISA法診斷禽流感
          PCR-ELISA是將一步RT-PCR技術與酶聯免疫吸附法相結合,檢測病毒的一項診斷技術。PCR的一對引物中,其中一個用生物素標記、另一個用地高辛標記,在酶標微孔板上用親和素包被,PCR擴增后純化片段加入微孔板中。此時,微孔板上包被的親和素將與生物素標記引物上的生物素特異性結合而捕捉了PCR片段,然后在微IL板中加入辣根過氧化物酶標記的抗地高辛抗體,該抗體將與地高辛標記引物上的地高辛結合,從而形成親和素-生物素-PCR片段-地高辛-地高辛抗體-辣根過氧化物酶復合物。加入酶的相應底物進行顯色,便可判斷PCR擴增的有無。由于該方法是PCR和ELISA技術的結合,所以它是一種兩級放大系統、靈敏度更高。同時這種方法避免了PCR產物分析時,電泳的電極及染色過程,所以更為快捷、簡便和靈敏。丹麥學者MMunch等建立的RT-PCR-ELISA方法,比常規RT-PCR敏感10~100倍,1個毒株(EID50=10-84)的感染性尿囊液經10-7稀釋仍能檢出,與雞胚病毒分離的敏感性一致。
          PCR-ELISA法診斷禽流感
          國內亢文華等針對高致病性禽流感H5亞型病毒的包含多堿性氨基酸裂解位點特異性片斷,設計用生物素和地高辛標記的特異性引物,從活禽咽拭子、肛拭子、糞便及病死禽組織病料中擴增標記RT-PCR產物,再以ELISA方法,用生物親和素包被的微量板孔中雜交捕獲RT-PCR產物·,再在微孔板中加入辣根過氧化物酶標記的抗地高辛抗體,該抗體將與另一引物上的地高辛結合,從而形成生物親和素-生物素-PCR片段-地高辛-抗地高辛抗體-酶的復合物。加入酶的相應底物進行顯色,便可判斷PCR擴增的有無。由于該方法是PCR技術和ELISA技術的結合,所以它是一種兩級放大系統,即PCR放大和ELISA放大,試驗證實它的靈敏度已經超過雞胚分離法(熒光PCR檢出的zui低稀釋度為10-6.67,雞胚分離檢出的zui低稀釋度為10-7.67,PCR-ELtSA檢出的zui低稀釋度為10-8.8),證明本方法具有較高的敏感性,比普通PCR和熒光PCR更為快捷、簡便、靈敏,同時這種方法避免了PCR產物分析時的電泳及染色過程。
          PCR-ELISA法診斷禽流感
           

          主站蜘蛛池模板: 成人影片一区免费观看| 国产成人福利在线| 国产成人精品久久综合| 成人国产欧美精品一区二区| 国产麻豆成人传媒免费观看| 国产v片成人影院在线观看| 国产成人精品久久一区二区小说 | 成人综合婷婷国产精品久久蜜臀| 成人欧美日韩高清不卡| 四虎成人影院网址| 成人片黄网站色大片免费| 亚洲精品国产成人片| 在线91精品亚洲网站精品成人| 亚洲国产成人久久综合一区77| 成人免费男女视频网站慢动作| 亚洲国产欧美目韩成人综合 | 激情成人综合网| 国产成人综合久久精品免费| 成人超污免费网站在线看| 亚洲国产成人91精品| 国产成人无码精品久久久露脸 | 欧美日韩国产成人精品| 四虎影视永久地址www成人| 成人在线综合网| 成人理伦电影在线观看| 日本国产成人精品视频| 色老头成人免费综合视频| 亚洲国产成人久久一区www| 国产69久久精品成人看| 国产日韩成人内射视频| 国产精品成人亚洲| 国产成人无码一区二区三区在线| 成人免费福利视频| 成人免费看片又大又黄| 国产成人综合久久综合| 国产成人亚洲精品无码青青草原| 国产成人精品一区二三区 | 免费国产成人手机在线观看| 国产成人无码一区二区在线播放| 国产成人一区二区三区在线观看 | 成人免费乱码大片a毛片|