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          生物素-親和素系統(BAS)ELISA和免疫組化技術

          2011-11-07 [3332]

          生物素-親和素系統(BAS)ELISA和免疫組化技術

          20世紀70年代后期在免疫酶技術中利用生物素-親和素系統(biotin-avidinsystem,BAS)標記抗體發展了又一種新型生物反應放大技術,即BAS-ELISA技術,它使用生物素-親和素-過氧化物酶復合物作為指示劑,組成一新的生物放大系統進一步提高檢測的敏感度。生物素(biotin)是廣泛分布于動植物體內的一種生長因子,又稱輔酶R或維生素H。親和素(avidin)是卵白及某些微生物中的一種蛋白質,由4個亞單位組成。二者有高度親和力,且均能偶聯抗體、抗原和辣根過氧化物酶而不影響其生物學活性。
          生物素-親和素系統(BAS)ELISA和免疫組化技術
          在生物素-親和素系統中,借助所形成的親和素-生物素-酶復合物,追蹤生物素標記的抗原或抗體,通過酶催化底物顯色,可檢出相應的抗體或抗原。由于抗原或抗體分子可偶聯多個生物素,且1個親和素分子可結合4個生物素分子,組成新的生物放大系統,進一步提高檢測的靈敏度。由于BAS親和力高,所以具有高靈敏度、高特異性和穩定性等優點,在現代生物免疫學領域中已得到廣泛應用,并顯示出明顯的*性。已報道有用于放射免疫、免疫熒光和免疫電鏡等技術中,但應用更多的還是在酶免疫技術中。
          生物素-親和素系統(BAS)ELISA和免疫組化技術
          BAS用于檢測的基本方法可分為三大類:

          *類是標記親和素連接生物素化大分子反應體系,稱BA法,或標記親和素生物素法(LAB);

          第二類以親和素兩端分別連接生物素化大分子反應體系和標記生物素,稱為BAB法,或橋聯親和素-生物素法(BRAB);

          第三類是將親和素與酶標生物素共溫形成親和素-生物素-過氧化物酶復合物,再與生物素化的抗抗體接觸時,將抗原-抗體反應體系與ABC標記體系連成一體,稱為ABC法。

          免疫組化技術(immunohitochemistry teehenique)是應用標記的特異性抗體與組織或細胞抗原發生反應,結合形態學觀察,對抗原作定性、定量、定位檢測。它把免疫反應的特異性、組織化學的可見性巧妙地結合起來,借助顯微鏡(包括熒光顯微鏡、電子顯微鏡)的顯像和放大作用,在細胞水平、亞細胞水平檢測各種抗原物質(如蛋白質、多肽、酶、激素、病原體以及受體等),并可在原位顯示相應的基因和基因表達產物。免疫組化技術近年來得到迅速發展。20世紀50年代還于免疫熒光技術,之后逐漸發展建立起高度敏感,且更為實用的免疫酶技術。常用的技術包括酶免疫組化(辣根過氧化物酶標記)、免疫金組化(膠體金顆粒標記)、免疫電鏡技術(鐵蛋白、膠體金、過氧化物酶標記)等。

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