上海研域生物普及大鼠ELISA試劑盒測(cè)定得到準(zhǔn)確的結(jié)果

大鼠ELISA試劑盒的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。下面上海研域生物普及大鼠ELISA試劑盒樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，大鼠ELISA試劑盒應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。大鼠ELISA試劑盒用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可 將標(biāo)本放于 -20 ℃保存，但 應(yīng) 避免反復(fù)凍融 .

7.  不能檢測(cè)含NaN3的樣品 ，大鼠ELISA試劑盒因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

大鼠ELISA試劑盒操作步驟：

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100 μ l，然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 μ l，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100 μ l分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 μ l，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50 μ l棄掉，再各取50 μ l分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50 μ l分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 μ l，混勻后從第七、第八孔中分別取50 μ l加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 μ l，混勻后從第九第十孔中各取50 μ l棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50 μ l，濃度分別為1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L ）。

加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、 待測(cè)樣品孔 。大鼠ELISA試劑盒在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40 μ l，然后再加待測(cè)樣品10 μ l（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁， 輕輕 晃動(dòng) 混勻 。