酶標記抗體法標記抗體的制備

酶標記抗體法標記抗體的制備

酶標記抗體法（enzaymelabelledantibodytechnique）是用結合物將酶結合在抗體分子上，制備成酶標記抗體，通過抗原—抗體反應使抗原—抗體復合物上帶有酶分子，再借助酶對底物的特異性催化作用，在抗原—抗體反應部位形成不溶性有色產物，用于研究抗原物質分布和性質。酶標記抗體法又分為直接法和間接法， 目前應用zui多的酶是辣根過氧化酶（HRP），底物是3，3’—二氨基聯苯胺（DAB）。
 

抗體蛋白分子與酶分子（如HRP或AKP）以一定的方式相互交換，形成酶標記抗體，故稱酶標抗體或酶聯抗體，它是IHC酶標記抗體法的主要試劑，其質量好壞將直接影響到方法的敏感性和特異性。HRP可以以共價鍵或非共價鍵方式黏附在其他的蛋白質分子上，常見的標記方法有戊二醛一步法和二步法，也可以用過碘酸鈉氧化法，它們主要為共價鍵結合方式（反應式見圖4—2和圖4—3）；

另一種非共價鍵結合方式是用4，4’—二氟—3，3，—二硝基苯基砜（4，4／—difluoro-3，3，—dinitrophenylsulfone，FNPS）作為交聯試劑，該方法不常用。戊二醛二步法的標記效率要高于一步法，過碘酸鈉氧化法要高于戊二醛二步法。其主要原理是二種蛋白質分子的賴氨酸上的e基團和含氨基的N端經活化劑活化而結合。由于抗體和酶分子上所具有的反應基團很少，需通過功能基團（如戊二醛）將更多的抗體和酶分子結合在一起，酶分子首先和雙功能試劑結合，再與抗體分子結合。這樣可以結合更多的酶和抗體，而且無聚合物產生。HRP還可以與生物素和親和素結合。
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