研域(上海)生物幫您整理ELISA實驗操作要點樣本的技巧

研域生物幫您收集整理三類樣本的技巧: 由于ELISA實驗只能檢測可溶性蛋白質的含量，因此要求樣本應清晰透明并離心除去沉淀物或懸浮物質。為確保實驗的準確性， -20℃或-80℃保存的樣本應在1-6個月內完成檢測，4℃保存的樣本在一周內完成檢測。此外，樣本中不能含有會抑制HRP活性的NaN3，否則會造成假陰性結果。可用于ELISA實驗的樣本一般有血清、血漿、尿液、細胞培養上清以及組織勻漿等。不同樣本類型的預處理方法也不同。適當的樣本預處理是確保ELISA實驗正確性和準確性的第一步。這里，我們將介紹幾種不同樣本類型的處理方法。

血清

血清是ELISA實驗的樣本，其預處理也十分簡單。使用無熱原無內毒素的試管或離心管采集血液樣本，將試管或離心管在室內溫度下放置自然凝固（視室溫環境10分鐘到2小時不等）或4℃過夜，分離出血清，（建議傾斜試管或離心管以擴大液面的橫截面，使血清能更大程度的分離出來，），2-8℃條件離心5分鐘左右（5000-6000轉/分鐘），仔細收集上清，立即進行測定，建議在-20℃或-80℃下將收集的血清分裝保存，避免反復凍融，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。

注意事項：

在收集血液樣本的過程中應避免溶血，因為紅細胞在溶解時會釋放具有過氧化物酶活性的物質，這種情況下，ELISA實驗中將會出現非特異性顯色反應，導致檢測結果不準確，出現假陽性結果。另外，樣本還應避免細菌污染，因為細菌可能含有內源性HRP，也會導致檢測結果不準確。

血漿

應根據標本的要求選擇EDTA、肝素鈉、枸櫞酸納或檸檬酸鈉作為抗凝劑，使用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液樣本，采集后30分鐘內，混合10-20分鐘后，2-8℃條件離心5分鐘左右（5000-6000轉/分鐘），仔細收集上清液（血漿），建議在-20℃或-80℃下將收集的血清分裝保存，避免反復凍融。樣本應避免溶血或高血脂。保存過程中如有沉淀形成，使用前應該再次離心。

注意事項：

檢測前請仔細閱讀ELISA試劑盒說明書，查看該試劑盒針對抗凝劑是否有特殊要求。

尿液

用無菌管收集，2-8℃條件離心5分鐘左右（5000-6000轉/分鐘）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

細胞培養上清

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。將細胞培養上清液吸入離心管中并以2-8℃條件離心5分鐘左右（5000-6000轉/分鐘），除去細胞碎片和雜質，收集上清液備用，樣本保存在-20℃或-80℃，避免反復凍融，保存過程中如有沉淀形成，使用前應再次離心。

腦脊液

用無菌管收集，2-8℃條件離心5分鐘左右（5000-6000轉/分鐘），仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，使用前應再次離心。（采集大鼠腦脊液）的方法：采集腦脊液時，用濕紗布擦試大鼠頸背部皮膚，剪去背毛暴露皮膚。兩耳連線剪一橫切口(1. 5cm左右)，在其中點向尾側沿皮下剪開2cm，將皮分離兩側，擴大視野。緊貼大鼠頭骨依次逐層剪切各肌層，并斷端依次拉向尾側擴大視野。注意，有出血時用干紗布按壓止血，保持術口清晰。接近頸后黃韌帶時，小心地用7號注射針頭分離覆蓋的肌肉，暴露寰枕膜。用1ml注射器(針頭用止血鉗使針尖與針體成150度鈍角)，針斜面向上，近水平刺入蛛網膜下腔，固定針體，緩慢抽取腦脊液，一般采集量為100-200微升。)

唾液

用無菌管收集，2-8℃條件離心5分鐘左右（5000-6000轉/分鐘），仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，使用前應再次離心。

以上是研域(上海)生物幫您整理ELISA實驗操作要點樣本的技巧，希望可以幫助到大家！