酶聯(lián)免疫試劑盒原理及影響因素

       此種酶標(biāo)記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型變成有色的氧化型，出現(xiàn)顏色反應(yīng)。因此，可通過底物的顏色反應(yīng)來判定有無相應(yīng)的免疫反應(yīng)，顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應(yīng)可通過酶聯(lián)免疫試劑盒檢測儀進行定量測定，這樣就將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來，使ELISA(酶聯(lián)免疫試劑盒)方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。

酶聯(lián)免疫試劑盒在操作過程的影響因素如下：

1、酶聯(lián)免疫試劑盒操作前應(yīng)對實驗的物理參數(shù)有充分的了解，如環(huán)境溫度(保持在18C～25℃)、反應(yīng)孵育溫度和孵育時間、洗滌的次數(shù)等，要先查看水育箱溫度，是否符合要求。

2、酶聯(lián)免疫試劑盒要保證加液量一致我們在使用時感覺滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量不準(zhǔn)，造成顯色不統(tǒng)一，判斷錯誤。

3、正確使用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標(biāo)本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺，血清殘留在反應(yīng)孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次序要與說明書一致，否則可導(dǎo)致結(jié)果錯誤，實驗重復(fù)性差。

4、酶聯(lián)免疫試劑盒顯色液量不可過多加樣的工作環(huán)境不能處于陽光直射的環(huán)境下，加顯色系統(tǒng)后要避光反應(yīng)，顯色液量不能過多，以免顯色過強。

5、手工洗板加洗液時沖擊力不要太大，洗滌次數(shù)不要超過說明書推薦的洗滌次數(shù)，洗液在反應(yīng)孑L內(nèi)滯留的時間不宜太長。不要使洗液在孑L間竄流，造成孔問污染，導(dǎo)致假陰性或假陽性。

酶聯(lián)免疫試劑盒的使用注意事項具體如下：

1. 酶聯(lián)免疫試劑盒在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液工作液時，請以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。

2. 濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。

3. 一次加樣時間最好控制在分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。

5. 酶聯(lián)免疫試劑盒的洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。

6. 如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請最后乘以稀釋倍數(shù)。

7. 剛開啟酶聯(lián)免疫試劑盒的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。

8. 酶聯(lián)免疫試劑盒保存：未開封的試劑盒應(yīng)儲存于2-8℃;開封后的酶標(biāo)板應(yīng)與干燥劑一起儲存于鋁箔袋中置于2-8℃保存。僅在此出儲存條件下，產(chǎn)品在有效期內(nèi)可正常使用。