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          96T大鼠白細胞介素-6ELISA試劑盒安徽,六安

          2012-04-26 [1565]

           大鼠白細胞介素-6ELISA試劑盒安徽,六安  

           
          本試劑僅供研究使用  標本:血清或血漿
           大鼠白細胞介素-6ELISA試劑盒安徽,六安 
          試驗原理:
          IL-6試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知IL-6濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將IL-6和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中IL-6的濃度呈比例關系。
           大鼠白細胞介素-6ELISA試劑盒安徽,六安  
          試劑盒內(nèi)容及其配制
          試劑盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制
          96/48人份酶標板1塊板(96T)半塊板(48T)即用型
          塑料膜板蓋1塊半塊即用型
          標準品:800pg/ml1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按說明書進行稀稀
          空白對照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型
          標準品稀釋緩沖液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型
          生物素標記的抗IL-6抗體1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型
          親和鏈酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型
          洗滌緩沖液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按說明書進行稀釋
          底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
          底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
          終止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
           
          自備材料
          1.蒸餾水。
          2.加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
          3.振蕩器及磁力攪拌器等。
           
          安全性
          1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
          2.實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
          3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
           
          操作注意事項
          1.試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
          2.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
          3.不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
          4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
          5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
          6.洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
          7.底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
          8.加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
          9.按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
           
          樣品收集、處理及保存方法
          1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
          2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
          3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
          4、保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
           
          試劑的準備
          1.標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
          800 pg/ml(6號標準品)原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
          400 pg/ml(5號標準品)100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
          200 pg/ml(4號標準品)100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
          100 pg/ml(3號標準品)100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
          50 pg/ml(2號標準品)100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
          25 pg/ml(1號標準品)100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
          0 pg/ml(空白對照)原始濃度不用稀釋直接加入50ul。
           
          2.洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。
           
          操作步驟
          1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
          2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
          3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
          4.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
          5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
          6.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
          7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
          8.取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
          9.在450nm波長處測定各孔的OD值。
           
          建議使用的實驗方案
          標準品濃度(pg/ml)
          A800800樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
          B400400樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
          C200200樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
          D100100樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
          E5050樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
          F2525樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
          G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
          H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
           
           
          局限
          6號標準品以上的結果為非線性的,根據(jù)此標準曲線無法得到的結果。
           
          試劑盒性能
          1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
          2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
          3. 重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
           
          結 果 判 斷 與 分 析
          1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
           
          2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的IL-6標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的IL-6含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
           
          3、檢測值范圍:0-800pg/ml
           
          4、敏感度: 1.0 pg/ml
          A2675-250gAluminum distearate 堿式硬脂酸鋁堿[300-92-5]
          AB0080-100gAluminum stearate 硬脂酸鋁[637-12-7]
          A2140-100gAluminum fluoride trihydrate 氟化鋁三水[15098-87-0]
          AB0023-250gAluminum hydroxide 氫氧化鋁[21645-51-2]
          A1951-100gAluminum isopropoxide 異丙醇鋁[555-31-7]
          AB0026-250gAluminum nitrate, nonahydrate 硝酸鋁九水[7784-27-2]
          AT1357-500gAluminum oxide, active 酸性氧化鋁[1344-28-1]
          AT1358-500gAluminum oxide, active 中性氧化鋁[1344-28-1]
          AB0030-25gAluminon 玫紅三羧酸銨[569-58-4]
          AB0031-10gAmaranth 莧菜紅[915-67-3]
          A6412-50g3-Aminoisonicotinic acid 3-氨基異煙酸[2941-78-8]
          AT1359-500gAluminum oxide, active 堿性氧化鋁[1344-28-1]
          PB0755-100gAluminum potassium sulfate docecahydrate 硫酸鋁鉀十二水[7784-24-9]
           
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