細胞培養基技術說明

       在醫學遺傳學研究中應用廣泛的是外周血淋巴細胞、皮膚或纖維細胞和各種能在體外長期生長的細胞系。外周血淋巴細胞培養基具有時間短、技術簡便、可重復取材等優點，它在臨床染色體分析中使用廣泛。體外培養細胞培養基株可在培養過程中發生自發的或在外界作用下的轉化，成為細胞系，也可直接建成細胞系，細胞培養基系能在體外無取制的傳代和生長。細胞系通常具有非整倍體細胞和各個細胞的核型不相同特征。但細胞克隆的細胞系其這一特征可以不明顯。

細胞在體外培養中所需的條件與體內細胞基本相同。

1、無污染環境

       培養環境無毒和無菌是保證細胞培養基生存的首要條件。當細胞放置于體外培養時，與體內相比細胞丟失了對微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代謝物質積累等，可導致細胞培養基死亡。因此在進行培養中，保持細胞生存環境無污染、代謝物及時清除等，是維持細胞生存的基本條件。

2、恒定的溫度

　　維持培養細胞培養基旺盛生長，必須有恒定適宜的溫度。人體細胞培養的標準溫度為36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細胞培養基的正常代謝會受到影響，甚至死亡。培養細胞對低溫的耐受力較對高溫強，溫度上升不超過39℃時，細胞代謝與溫度成正比；人體細胞在39-40℃1小時，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復；在40-41℃1小時，細胞會普遍受到損傷，僅小半數有可能恢復；41-42℃1小時，細胞培養基受到嚴重損傷，大部分細胞培養基死亡，個別細胞仍有恢復可能；當溫度在43℃以上1小時，細胞培養基全部死亡。

3、氣體環境

　　氣體是人體細胞培養基生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環，產生供給細胞生長增殖的能量和合成細胞生長所需用的各種成分。開放培養時一般把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環境中。

　　二氧化碳既是細胞培養基代謝產物，也是細胞培養基生長繁殖所需成分，它在細胞培養中的主要作用在于維持培養基的PH值。大多數細胞的適宜PH為7.2-7.4，偏離這一范圍對細胞培養將產生有害的影響。但細胞耐酸性比耐堿性大一些，在偏酸環境中更利于細胞生長。有資料顯示，原代羊水細胞培養PH6.8時zui適。

　　細胞培養基液PH濃度的調節常用的為加NaHCO3的方法，因為NaHCO3可供CO2，但二氧易于逸出，故適用于封閉培養，也起緩沖作用，有防止PH迅速變動的特性而用于開放細胞培養技術中，其zui大優點是在開放式培養或細胞觀察時能維持較恒定的PH值。