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          96T小鼠促甲狀腺素(TSH)ELISA試劑盒江西,南昌

          2012-05-14 [1483]

           小鼠促甲狀腺素(TSH)ELISA試劑盒江西,南昌

          本試劑僅供研究使用  標本:血清或血漿

           小鼠促甲狀腺素(TSH)ELISA試劑盒江西,南昌

          試驗原理:

          TSH試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知TSH濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將TSH和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中TSH的濃度呈比例關系。

           小鼠促甲狀腺素(TSH)ELISA試劑盒江西,南昌

          試劑盒內容及其配制

          試劑盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制

          96/48人份酶標板1塊板(96T)半塊板(48T)即用型

          塑料膜板蓋1塊半塊即用型

          標準品:80mU/L1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按說明書進行稀稀

          空白對照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型

          標準品稀釋緩沖液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型

          生物素標記的抗TSH抗體1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型

          親和鏈酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型

          洗滌緩沖液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按說明書進行稀釋

          底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型

          底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型

          終止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型

           

          自備材料

          1.蒸餾水。

          2.加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

          3.振蕩器及磁力攪拌器等。

           

          安全性

          1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。

          2.實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

          3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

           

          操作注意事項

          1.試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。

          2.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。

          3.不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

          4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

          5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

          6.洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

          7.底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

          8.加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

          9.按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

           

          樣品收集、處理及保存方法

          1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

          2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

          3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

          4、保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

           

          試劑的準備

          1.標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:

          80 mU/L(6號標準品)原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。

          40 mU/L(5號標準品)100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液

          20 mU/L(4號標準品)100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液

          10 mU/L(3號標準品)100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液

          5.0 mU/L(2號標準品)100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液

          2.5 mU/L(1號標準品)100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液

          0 mU/L(空白對照)原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

           

          2.洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

           

          操作步驟

          1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。

          2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。

          3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。

          4.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

          5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

          6.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

          7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。

          8.取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。

          9.在450nm波長處測定各孔的OD值。

           

          建議使用的實驗方案

          標準品濃度(mU/L)

          A8080樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

          B4040樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

          C2020樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

          D1010樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

          E5.05.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

          F2.52.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

          G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

          H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

           

           

          局限

          6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。

           

          試劑盒性能

          1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

          2. 特異性:不與人其它細胞因子反應。

          3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

           

          結 果 判 斷 與 分 析

          1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

           

          2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的TSH標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的TSH含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

           

          3、檢測值范圍:0-80mU/L

           

          4、敏感度: 0.1 mU/L

          DB0394-25g3,5-Dichloro-2-hydroxy-benzenesulfonic acid sodium salt 3,5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉[54970-72-8]
          DB0395-25g2, 6-Dichloroindophenol 2,6-二氯靛酚[956-48-9]
          DB0396-5g2, 6-Dichloroindophenol, sodium salt, hydrate 2,6-二氯靛酚鈉[620-45-1]
          D1417-500g2,4-Dichlorophenol 2,4-二氯苯酚[120-83-2]
          D3055-500g2,6-Dichlorophenol 2,6-二氯苯酚[87-65-0]
          DB0166-100g2,4-Dichlorophenoxy acetic acid 2,4-二氯苯氧基乙酸[94-75-7]
          DB0166-500g2,4-Dichlorophenoxy acetic acid 2,4-二氯苯氧基乙酸[94-75-7]
          F715081-1gFast red TR salt 固紅TR/
          F715081-5gFast red TR salt 固紅TR/
          DB0722-100g2,4-Dichlorophenoxy acetic acid, sodium salt, monohydrate 2,4-二氯苯氧基乙酸鈉[2702-72-9]
          DB0722-500g2,4-Dichlorophenoxy acetic acid, sodium salt, monohydrate 2,4-二氯苯氧基乙酸鈉[2702-72-9]
          D6440-100g4,6-Dichloropyrimidine 4.6-二氯嘧啶[1193-21-1]
           

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