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          48T人谷氨酸脫羧酶(GAD)酶聯免疫分析ELISA試劑盒

          2012-07-04 [1245]

          人谷氨酸脫羧酶(GAD)酶聯免疫分析ELISA試劑盒

          本試劑盒僅供研究使用。
           

          人谷氨酸脫羧酶(GAD)酶聯免疫分析ELISA試劑盒

          使用目的:
            本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中谷氨酸脫羧酶(GAD)表達。
           

          人谷氨酸脫羧酶(GAD)酶聯免疫分析ELISA試劑盒

          實驗原理
          本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人谷氨酸脫羧酶(GAD)表達。用純化的人谷氨酸脫羧酶(GAD)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中谷氨酸脫羧酶(GAD)相結合,經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的谷氨酸脫羧酶(GAD)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中人谷氨酸脫羧酶(GAD)的存在與否。
             試劑盒組成
          1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
          2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 陽性對照 0.5ml×1瓶
          3 酶標包被板 12孔×8條 9 陰性對照 0.5ml×1瓶
          4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
          5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 
          6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
          標本要求
          1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
          2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
          操作步驟
          編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)


          加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
          溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
          配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
          洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
          加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
          溫育:操作同3。
          洗滌:操作同5。
          顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
          終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉)。
          測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。


          操作程序總結:

           


          計算和結果判定:
             試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
             臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
             陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為谷氨酸脫羧酶(GAD)陰性
             陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為谷氨酸脫羧酶(GAD)陽性
           。
          注意事項
          1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
          2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
          3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
          封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
          5.底物請避光保存。
          6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
          7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。
          保存條件及有效期
          1.試劑盒保存:;2-8℃。
          2.有效期:6個月
          ND0056-0.5ml NTP Mixture (10mM) 10mM溶液 (ATP, CTP, GTP & UTP) / 0.5ml
          NE891-100ml Nuclease Eliminator Solution 去核酸酶試劑(液體) / 100ml
          NE891-500ml Nuclease Eliminator Solution 去核酸酶試劑(液體) / 500ml
          NLS004797-15KU Nuclease S7, from Staphylococcus aureus 核酸酶 S7 / 15KU
          NB0390-5g Nystatin 制霉菌素 [1400-61-9] 5g
          NB0390-25g Nystatin 制霉菌素 [1400-61-9] 25g
          N0418-5MU Nystatin 制霉菌素 [1400-61-9] 5MU
          N0418-25MU Nystatin 制霉菌素 [1400-61-9] 25MU
          BS728-10ml Nystatin solution (5mg/ml) 制霉菌素溶液 / 10ml
          O1465-25g n-Octadecane 正十八烷 [593-45-3] 25g
          O1466-250g 1-Octadecanol 硬脂醇 [112-92-5] 250g
           

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