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          96T人視黃醇 ELISA檢測(cè)試劑盒

          2012-08-02 [1365]

          人視黃醇 ELISA檢測(cè)試劑盒          

          本試劑僅供研究使用      標(biāo)本:血清或血漿

          試驗(yàn)原理:
              Retinol 試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知Retinol 濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將Retinol 和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中Retinol 的濃度呈比例關(guān)系。

          自備材料
          蒸餾水。
          加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
          振蕩器及磁力攪拌器等。

          安全性
          避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗。
          實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
          不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

          人視黃醇 ELISA檢測(cè)試劑盒

          操作注意事項(xiàng)
          試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
          實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
          不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
          使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
          使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
          洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
          底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
          加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
          按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

          樣品收集、處理及保存方法
          血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
          血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
          細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
          組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
          保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

          洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

          人視黃醇 ELISA檢測(cè)試劑盒

          操作步驟
          使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
          根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
          加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
          甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
          每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
          甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
          每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
          取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
          在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

          6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到的結(jié)果。

          試劑盒性能
          1. 靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
          2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
          3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

          人視黃醇 ELISA檢測(cè)試劑盒

          結(jié) 果 判 斷 與 分 析
          1、儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

          2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的Retinol 標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的Retinol 含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

          3、檢測(cè)值范圍:0-800ug/L

          4、敏感度: 1.0 ug/L
          Methyl green, zinc chloride salt 甲基綠 [7114-03-6] 10g
          Methyl green, zinc chloride salt 甲基綠 [7114-03-6] 10g
          Methyl 4-hydroxyphenylacetate, 對(duì)羥基苯乙酸甲酯 [14199-15-6] 100g
          Methyl (s)-(-)lactate 乳酸甲酯 [27871-49-4] 500ml
          1-Methylimidazole 1-甲基咪唑 [616-47-7] 500ml
          2-Methylimidazole 2-甲基咪唑 [693-98-1] 250g
          4(5)-Methylimidazole 4(5)-甲基咪唑 [822-36-6] 100g
          2-Methylindole 2-甲基吲哚 [95-20-5] 25g
          5-Methylindole 5-甲基吲哚 [614-96-0] 5g
          Methyl indole-4-carboxylate 吲哚-4-羧酸甲酯 [39830-66-5] 5g
          Methyl methoxyacetate 甲氧基乙酸甲酯 [6290-49-9] 250ml
          N-Methylmorpholine N-甲基嗎啡啉 [109-02-4] 250ml
          Methyl myristate 十四酸甲酯 [124-10-7] 250g
          2-Methyl-5-nitrophenol 5-硝基鄰甲酚 [5428-54-6] 250g
          4-Methyl-2-nitrophenol 鄰硝基對(duì)甲酚 [119-33-5] 250g
          Myokinase from Yeast 肌激酶 [9013-02-9] 10KU
          Myokinase from Yeast 肌激酶 [9013-02-9] 30KU
          NAD trihydrate 氧化型輔酶 I [53-84-9] 1g
          Methyl octanoate 辛酸甲酯 [111-11-5] 250ml
          Methyl orange 甲基橙 [547-58-0] 50g
          Methyl palmitate 十六酸甲酯 [112-39-0] 250g
          4-Methyl-2-pentanone 4-甲基-2-戊酮 [108-10-1] 50ml
          m-Methylphenol 間甲基苯酚 [108-39-4] 500ml
          o-Methylphenol 鄰甲基苯酚 [95-48-7] 500ml
          p-Methylphenol 對(duì)甲基苯酚 [106-44-5] 500ml
          3-Methyl-1-phenyl-5-pyrazolone 1-苯基-3-甲基-5-吡唑酮 [89-25-8] 250g
          N-Methyl piperazine N-甲基哌嗪 [109-01-3] 250ml
          1-Methyl-3-pyrrolidinol N-甲基-3-吡咯醇 [13220-33-2] 5g
          N-Methyl-2-pyrrolidone N-甲基吡咯烷酮 [872-50-4] 100ml
          Methyl red 甲基紅 [493-52-7] 25g
          Methyl red 甲基紅 [493-52-7] 100g
          2-Methylresorcinol 2,6-二羥基甲苯 [608-25-3] 100g

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