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          誘導動物細胞融合的方法介紹

          2009-10-09 [4694]

          誘導動物細胞融合的方法

          在體外培養條件下,動物細胞會自發融合,但是頻率極低。因此,一般都需要添加具有誘導細胞融合效應的生物或化學藥劑,或者采用電融合技術,人為地促進細胞融合。

          病毒誘導融合 

          病毒是zui早采用的融合劑。常用于誘導動物細胞融合的病毒有仙臺病毒、新城雞瘟病毒、皰疹病毒等,其中仙臺病毒zui常用。用作融合劑的病毒必須事先用紫外線或β-丙內酯滅活,使病毒的感染活性喪失而保留病毒的融合活性。用滅活的仙臺病毒誘導細胞融合,融合率較高,對各種動物細胞都適宜,且仙臺病毒能在雞胚中大量繁殖,容易培養;但是仙臺病毒不穩定,在保存過程中融合活性會降低,并且制備過程比較煩瑣。此外,病毒引進細胞后,可能會對細胞的生命活動產生干擾。

          聚乙二醇PEG誘導融合 

          聚乙二醇PEG具有強烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白質的作用,能夠有效地促進植物原生質體和動物細胞的融合。在不同種類的動物細胞混合液中加入聚乙二醇,就會發生細胞凝集作用;在稀釋和除去聚乙二醇的過程中,就會發生細胞融合。聚乙二醇誘導細胞融合的機理,目前還不太清楚。聚乙二醇是化學試劑,使用起來很方便,誘導細胞融合的頻率比較高,但是它有一定毒性,對有些細胞(如卵細胞)不適用。

          電融合

           20世紀80年代建立起來的電融合技術,是將兩種細胞的混合液置于低壓交流電場中,使細胞聚集成串珠狀,然后施加高壓電脈沖,以促使細胞融合。緊密排列的細胞,在相互接觸的細胞膜之間會出現無蛋白顆粒的脂質區,當受到電擊時,這個區域就會被擊穿,產生脂雙層膜孔,導致細胞之間的細胞質連通,進而發生細胞融合。電融合技術有許多優點,如誘導細胞融合的頻率高,對細胞無毒害作用,操作簡便,可重復性好。
           



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