酶聯免疫試劑盒的工作原理

酶聯免疫試劑盒是基于經典酶聯夾心技術原理，能測量人促卵泡素（FSH），只能用于研究用途，不得用于醫學診斷。
酶聯免疫試劑盒工作原理
促卵泡素（FSH）是動物腦垂體分泌作用于卵巢卵泡生長、發育、分化、成熟和排卵的重要繁殖激素.由于是生物大分子,不能透過細胞膜,FSH必須與靶細胞膜上的促卵泡素受體（FSHR）結合,經過受體介導將信息傳遞到靶細胞內,才能發揮其生物學功能.所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯免疫吸附測定試劑盒（ELISA）。預先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體，經生物素（biotin）標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應；經過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關。
酶聯免疫試劑盒工作環境
1． 37℃恒溫箱。
2． 標準規格酶標儀。
3． 自動洗板機。
4． 單通道或多通道可調節移液器以及其吸頭。
5． 蒸餾水，容量瓶等
6． 干凈的試管和Eppendof管
酶聯免疫試劑盒操作步驟
1． 確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數目。
2． 將倍比稀釋的標準品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標本按100ul每孔加入。
3． 酶標板加上蓋，37℃反應90分鐘。
4． 反應后用自動洗板機吸去酶標板內的液體；或甩去酶標板內液體，再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。
5． 將準備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應60分鐘。
6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次，每次浸泡1分鐘左右。
7． 將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應30分鐘。
8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次，每次浸泡1-2分鐘左右。
9． 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液，37℃避光反應，反應過程中，要經常的觀察，當肉眼可見標準品的前3-4孔有 明顯的梯度藍色，后3-4孔差別不明顯時，即可加入TMB終止液0.1ml/孔。（顯色反應zui長不要超過30分鐘）。
10． 用酶標儀在450nm測定O.D.值。
11． 根據樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度。用戶也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了N倍，其實際濃度應該×N。