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          酶聯免疫試劑盒的工作原理

          2013-08-15 [1576]

          酶聯免疫試劑盒是基于經典酶聯夾心技術原理,能測量人促卵泡素(FSH),只能用于研究用途,不得用于醫學診斷。
          酶聯免疫試劑盒工作原理
          促卵泡素(FSH)是動物腦垂體分泌作用于卵巢卵泡生長、發育、分化、成熟和排卵的重要繁殖激素.由于是生物大分子,不能透過細胞膜,FSH必須與靶細胞膜上的促卵泡素受體(FSHR)結合,經過受體介導將信息傳遞到靶細胞內,才能發揮其生物學功能.所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯免疫吸附測定試劑盒(ELISA)。預先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體,經生物素(biotin)標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應;經過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關。
          酶聯免疫試劑盒工作環境
          1. 37℃恒溫箱。
          2. 標準規格酶標儀。
          3. 自動洗板機。
          4. 單通道或多通道可調節移液器以及其吸頭。
          5. 蒸餾水,容量瓶等
          6. 干凈的試管和Eppendof管
          酶聯免疫試劑盒操作步驟
          1. 確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數目。
          2. 將倍比稀釋的標準品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標本按100ul每孔加入。
          3. 酶標板加上蓋,37℃反應90分鐘。
          4. 反應后用自動洗板機吸去酶標板內的液體;或甩去酶標板內液體,再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。
          5. 將準備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應60分鐘。
          6. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次,每次浸泡1分鐘左右。
          7. 將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應30分鐘。
          8. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次,每次浸泡1-2分鐘左右。
          9. 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液,37℃避光反應,反應過程中,要經常的觀察,當肉眼可見標準品的前3-4孔有 明顯的梯度藍色,后3-4孔差別不明顯時,即可加入TMB終止液0.1ml/孔。(顯色反應zui長不要超過30分鐘)。
          10. 用酶標儀在450nm測定O.D.值。
          11. 根據樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度。用戶也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了N倍,其實際濃度應該×N。

           

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