看ELISA試劑盒如何檢測絲蟲抗體

絲蟲病（filariasis）在我國是由斑氏和馬來絲蟲寄生于人體淋巴系統所引起的慢性寄生蟲病，通過蚊蟲傳播。早期臨床特征主要為淋巴管炎和淋巴結炎，晚期為淋巴管阻塞形成象皮腫。常用的檢查方法是用ELISA試劑盒檢測絲蟲抗體。
[臨床意義] 絲蟲病潛伏期4個月至15年，平均1年左右。流行區可有50％-75％的“無癥狀”感染者。ELISA法檢測絲蟲抗體陽性可對該病進行確診，陰性不能排除絲蟲病感染。
1．急性期 突出癥狀為淋巴結炎、淋巴管炎、精囊炎、絲蟲熱等。
2．慢性期 由于炎癥反復發作，使淋巴管和淋巴結因增生的肉芽組織阻塞，出現*的臨床癥狀和體征。
[檢測方法] ELISA試劑盒法
[方法學原理] 將微絲蚴固定在玻片上制成固相抗原片，加入待檢血清和酶標記抗體后，若待檢血清中存在相應抗體，則形成的抗原抗體復合物附著在玻片上。加入相應底物后顯色，在顯微鏡下進行觀察。
[標本準備] 不抗凝靜脈血2ml。
[試劑]
1．微絲蚴固相抗原片
2．底物溶液
3．0．2mol／LpH7．6硼酸緩沖液
4．HRP-抗人IgG
5．洗滌液與稀釋液
[ELISA試劑盒檢測步驟]
1．于抗原點片上滴加1：40和1：80稀釋的待檢血清，在37C環境中濕盒2h。
2．流水沖去多余血清后于洗滌液中浸洗3次，每次5min。
3．滴加zui適濃度HRP-抗人IgG，在37℃環境中濕盒1h。
4．流水沖去多余血清后于洗滌液中浸洗3次，每次5min。
5．滴加底物1滴于低倍顯微鏡下觀察。
[結果觀察] 觀察200條微絲蚴，反應結果判定如下。
3+ >95％微絲蚴呈棕色或橙色；
2+ ≥50％微絲蚴呈棕色或橙色；
1+ ≥5％微絲蚴呈棕色、橙色或淺棕色；
± <5％微絲蚴呈淺棕色或橙色；
一 微絲蚴無色或稍呈淺。
凡血清1：40和1：80均為陽性反應（+一+++）者，定為陽性；1：40為“+”或“土”，定為可疑；1：40為“-”者定為陰性。
[參考范圍] 絲蟲抗體陰性
[ELISA試劑盒檢測注意事項]
1．試驗前試劑應在室溫環境中平衡30min。
2．洗滌時應注意不能將玻片上的固相抗原沖掉。