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          ELISA試劑盒測定在實驗中結(jié)果錯誤的原因分析總結(jié)

          2013-10-10 [1253]

           Engvall 和Perlmann于1971年應用將酶附著于抗原或者抗體,通過化學反應的測定終產(chǎn)物顏色的方法進行了IgG的定量測定,并命名為"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"也就是我們所說的即酶聯(lián)免疫吸附試驗,這種固相酶免疫測定方法已經(jīng)在科研領域得到了廣泛的應用。
          ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定,具有靈敏度高,操作簡單等優(yōu)點,但是在具體實驗過程中影響因素較多,并且要按照嚴格的說明要求,在臨床檢驗中除正常反應外,有時常可見到一些錯誤結(jié)果(即假陽性或假陰性結(jié)果)。
          引起ELISA試劑盒測定錯誤結(jié)果的原因主要有:①標本因素;②試劑因素;③操作因素。本文就標本因素對ELISA測定的影響做如下討論。
          (1)類風濕因子
          人血清中IgM、IgG型類風濕因子(RF)可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結(jié)合,從而導致假陽性。解決該情況的辦法是:①用F(ab)2替代完整的IgG;②標本用聯(lián)有熱變性(63℃,10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效);③檢測抗原時,可以用2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中,使RF降解。
          (2)補體
          ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標記二抗過程中,抗體分子發(fā)生變構,其FC段的補體C1q分子結(jié)合位點被暴露出來,使C1q 可以將二者連接起來,從而造成假陽性。解決的辦法是:①用EDTA稀釋標本;②用53℃,10 min或56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。
          (3)嗜異性抗體
          人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig (s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,也能造成假陽性。解決的辦法是:可在標本稀釋液中加入過量的動物Ig (s) ,但加入量不足或亞類不同時無效。
          (4)嗜靶抗原的自身抗體
          抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,有時能與靶抗原結(jié)合形成復合物,在 ELISA試劑盒方法中均可干擾抗原抗體測定結(jié)果。為避免以上情況出現(xiàn),解決的辦法是:測定前需用理化方法將其解離后再測定。
          (5)醫(yī)源性誘導的抗鼠Ig (s) 抗體
          臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療,用放射性同位素標記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術,均有可能使這些病人體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體;另外,被鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠Ig (s) 抗體。這些病人ELISA測定時均可產(chǎn)生假陽性。解決的辦法是:測定抗原時,在標本中加入足量的正常鼠Ig (s) ,從而克服由于上述原因造成的假陽性。
          (6)交叉反應物質(zhì)
          類地高辛、類AFP樣物質(zhì)等,是與靶抗原有交叉反應的物質(zhì)。在用多抗測定抗原時對測定結(jié)果影響不大,但在用單克隆抗體測定抗原時,如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應的靶決定簇時,也會出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
          (7)標本中其它成分的影響 血清脂質(zhì)過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等,均對 ELISA試劑盒測定結(jié)果有干擾作用。

           

           

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