用elisa試劑盒檢測樣本的原理和步驟

1.elisa試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存。實驗操作中必須使用一次性吸頭 ，避免交叉污染。
2．加樣：加樣時，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔之見的時間間隔過大，否則將會導致不同的預孵育時間，從而影響實驗的準確性以及重復性；一般加樣時間控制在10分鐘內，如果樣本數量過多，可使用多道移液器 。
3.孵育：樣品要在密閉的容器內進行孵育，嚴格按照說明書上規定的孵育時間和溫度進行。
4.洗滌：洗滌過程中反應孔中的殘留的洗滌液應在濾紙 上充分拍干，同時要消除板底殘留的液體和手指痕跡，避免影響zui后的酶標儀 讀數。
5.反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化（比如，10分鐘左右），如果顏色較深，請提前加入終止液終止反應。|
6.建議實驗前預測樣品含量，如樣品濃度過高，應對樣品進行稀釋，計算結果時乘以相應的稀釋倍數。|7.建議使用本試劑盒時先做預實驗（即先做標準曲線，試用幾個標本），如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經銷商，如果因運輸過程導致試劑盒失效，可要求調換，但概不承擔產品本身以外的任何損失。
操作步驟
1. 取出elisa試劑盒，于室溫（20-25℃）放置15-30分鐘。實驗過程應在室溫（20-25℃）內進行。
2. 取出酶標板，按照標準品的次序分別加入50μl的標準品溶液于空白微孔中。
3. 空白微孔中加入50μl的樣品，空白對照加入50μl的蒸餾 水；
4. 在樣品孔中加入10μl的生物素；（不含空白對照孔,切忌：生物素只加樣品孔！）
5. 在各孔中加入100μl的酶標記溶液；（不含空白對照孔）
6. 將酶標板用封口膠密封后，37℃孵育反應 1小時；（在孵育箱中保持穩定的溫度與濕度）
7. 充分清洗酶標板3-5次，保持各孔有充足的水壓；（濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋）
8. 酶標板洗滌后用吸水紙*拍干；
9. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl；（不含空白對照孔）
10. 20-25℃下避光反應15分鐘；
11. 各孔加入50μl終止液，終止反應；
結果判斷
1. 30分鐘內在波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值；
2. 以OD值為縱坐標，以標準品的濃度為橫坐標，繪制曲線圖；
3. 根據樣品的OD值查找對應的濃度范圍；
4. 敏感度：0.1 ng/ml