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          分析影響ELISA試劑盒非特異性顯色

          2013-11-29 [974]

          聚苯乙烯ELISA試劑盒板因為原料的不同和制作工藝的差別,各產品的質量差異很大。溶血標本,紅細胞溶解破裂,開釋出血紅素形成,而血紅素中的鐵卟啉是過氧化物酶的類似物,以HRP為標記的ELISA測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。因此,在選擇ELISA試劑盒同時要對其使用的微孔板型號進行認證,評估。試劑盒特異性因素固相載體的選擇,ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種,以微量滴定板zui為常見。外源性干擾物,經常因樣品采集、貯存、處理不當造成如樣品溶血,被細菌污染,標本凝集不全等。如在冰箱中保留過久,其中的IgG可發生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。但因為受方法學及技術前提的限制,在酶聯吸附測定中有時不可避免的會泛起一定的非特異性,但我們可以通過以上措施把非特異性顯色降至zui低限底,從而進步檢測的特異性,并得到更正確、可靠的實驗結果。酶聯免疫吸附試驗(ELISA)自1971年自問世以來,以其敏感性高,特異性強,操縱簡便、安全,而廣泛應用于臨床診斷,開創了免疫學診斷的新紀元。

              綜上所述,因為酶聯免疫吸附技術目前在技術上缺乏尺度化,盡管目前上以及我國有了部門尺度血清或參比血清(血清盤)。因此,血標本在采集處理時應小心,在冰箱中保留不易過久。在酶聯免疫測定尤其是間接ELISA中,試劑的特異性取決于使用抗原的純度。標本凝集不全時,血清中會殘留部門纖維蛋白原,也易造成假陽性。檢修標本中含有酶標記物的干擾物,內源性干擾物類風濕因子(RF)、黃疸等,類風濕因子是可作用于多種動物以及人IgGFc段的自身抗體,多數為IgM類,能充當抗原成分與固相及酶標抗體反應,從而呈現非特異性顯色。如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP(辣根過氧化酶),有海內報道酶免HBsAg試劑檢測溶血標本時可造成假陽性。影響ELISA中非特異性顯色的原因良多,如ELISA試劑盒特異性、檢修標本中含酶標記物的干擾物,操縱過程中的題目。黃疸血標本中常含有內源性過氧化物酶,如用辣根過氧化物酶為標記物,就有可能產生非特異性顯色。
          目前因為技術前提的限制,包被用抗原或抗體的純度不可能達到100%,所以有些非特異性顯色不可避免,只能盡可能進步純度,進步特異性。它具有良好的吸附機能,孔底透明度高,空缺值低,各板之間、統一板各孔之間機能相近。但同其它免疫診斷方法一樣酶免試劑在它的研究、出產及使用中經常會遇到非特異性題目,本文就在實驗過程中產生的一些原因及如何采取一些措施,消除非特異性顯色作一分析。本文就這一原因作一扼要分析,以便可以通過以上措施把非特異顯色降至zui低限度,從而進步檢測的特異性,并得到更正確、可靠的實驗結果。

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