分析影響ELISA試劑盒非特異性顯色

聚苯乙烯ELISA試劑盒板因為原料的不同和制作工藝的差別，各產品的質量差異很大。溶血標本，紅細胞溶解破裂，開釋出血紅素形成，而血紅素中的鐵卟啉是過氧化物酶的類似物，以HRP為標記的ELISA測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。因此，在選擇ELISA試劑盒同時要對其使用的微孔板型號進行認證，評估。試劑盒特異性因素固相載體的選擇，ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種，以微量滴定板zui為常見。外源性干擾物，經常因樣品采集、貯存、處理不當造成如樣品溶血，被細菌污染，標本凝集不全等。如在冰箱中保留過久，其中的IgG可發生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。但因為受方法學及技術前提的限制，在酶聯吸附測定中有時不可避免的會泛起一定的非特異性，但我們可以通過以上措施把非特異性顯色降至zui低限底，從而進步檢測的特異性，并得到更正確、可靠的實驗結果。酶聯免疫吸附試驗（ELISA）自1971年自問世以來，以其敏感性高，特異性強，操縱簡便、安全，而廣泛應用于臨床診斷，開創了免疫學診斷的新紀元。

    綜上所述，因為酶聯免疫吸附技術目前在技術上缺乏尺度化，盡管目前上以及我國有了部門尺度血清或參比血清（血清盤）。因此，血標本在采集處理時應小心，在冰箱中保留不易過久。在酶聯免疫測定尤其是間接ELISA中，試劑的特異性取決于使用抗原的純度。標本凝集不全時，血清中會殘留部門纖維蛋白原，也易造成假陽性。檢修標本中含有酶標記物的干擾物，內源性干擾物類風濕因子（RF）、黃疸等，類風濕因子是可作用于多種動物以及人IgGFc段的自身抗體，多數為IgM類，能充當抗原成分與固相及酶標抗體反應，從而呈現非特異性顯色。如有細菌污染，菌體中可能含有內源性HRP（辣根過氧化酶），有海內報道酶免HBsAg試劑檢測溶血標本時可造成假陽性。影響ELISA中非特異性顯色的原因良多，如ELISA試劑盒特異性、檢修標本中含酶標記物的干擾物，操縱過程中的題目。黃疸血標本中常含有內源性過氧化物酶，如用辣根過氧化物酶為標記物，就有可能產生非特異性顯色。
目前因為技術前提的限制，包被用抗原或抗體的純度不可能達到100%，所以有些非特異性顯色不可避免，只能盡可能進步純度，進步特異性。它具有良好的吸附機能，孔底透明度高，空缺值低，各板之間、統一板各孔之間機能相近。但同其它免疫診斷方法一樣酶免試劑在它的研究、出產及使用中經常會遇到非特異性題目，本文就在實驗過程中產生的一些原因及如何采取一些措施，消除非特異性顯色作一分析。本文就這一原因作一扼要分析，以便可以通過以上措施把非特異顯色降至zui低限度，從而進步檢測的特異性，并得到更正確、可靠的實驗結果。