ELISA試劑盒的雙抗體夾心法檢測腦膜炎奈瑟菌可溶性抗原

ELISA試劑盒的實驗原理

用包被于固相載體的腦膜炎奈瑟菌（Neisseria meningitidis）多糖抗體，結(jié)合待測標(biāo)本中的相應(yīng)抗原，再加酶標(biāo)抗體形成夾心，zui后加底物使顯色。顯色深淺在一定范圍內(nèi)與標(biāo)本中腦膜炎奈瑟菌抗原的含量呈正相關(guān)。

主要試劑與器材

1.待檢血清或腦脊液；

2.抗腦膜炎奈瑟菌（A群）多糖抗體；

3.辣根過氧化酶（HRP）標(biāo)記抗體；

4.包被液、稀釋液、終止液；

5.酶標(biāo)儀。

ELISA試劑盒的操作步驟

1.包被抗體的制備：抗腦膜炎奈瑟菌血清用50%飽和硫酸銨鹽析，再通過SPA-Sepharose 4B免疫吸附柱，獲取IgG用于包被。

2.用包被液將包被抗體稀釋成20μg/ml，每孔100μl，4℃12h后用PBS洗3次。

3.待測標(biāo)本（需經(jīng)56℃，30min滅活）孵育2h，洗3次，拍干。

4.每孔加酶標(biāo)抗體（zui適工作稀釋度用方陣法選定）100μl，37℃孵育2h后洗3次，拍干。

5.每孔加底物（鄰苯二胺-H2O2）溶液100μl，37℃ 20min顯色，用2mol/L H2SO4終止反應(yīng)，測492nm吸光度（A）。

ELISA試劑盒的結(jié)果分析

用50-100份健康人混合血清按上述elisa測A值，以大于此A值均值的兩個標(biāo)準(zhǔn)差為陽性，也可以P/N值≥2.1為陽性。