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          豬超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)酶聯(lián)免疫分析 試劑盒使用說明書

          2014-03-10 [1270]

          超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

          本試劑盒僅供研究使用。

          檢測范圍:                                                          48T

          0.3μg/L -8μg/L

           

          使用目的:

          本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP含量

          實驗原理

          本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP水平。用純化的超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP再與HRP標記的超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP濃度。

          ELISA試劑盒組成

          1

          20倍濃縮洗滌液

          20ml×1

          7

          終止液

          3ml×1

          2

          酶標試劑

          3ml×1

          8

          標準品(16μg/L

          0.5ml×1

          3

          酶標包被板

          12孔×4

          9

          標準品稀釋液

          1.5ml×1

          4

          樣品稀釋液

          3ml×1

          10

          說明書

          1

          5

          顯色劑A

          3ml×1

          11

          封板膜

          2 

          6

          顯色劑B

          3ml×1/

          12

          密封袋

          1

          標本要求

          1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

          2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

          操作步驟

          1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

          8μg/L

          5號標準品

          150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

          4μg/L

          4號標準品

          150μl5號標準品加入150μl標準品稀釋液

          2μg/L

          3號標準品

          150μl4號標準品加入150μl標準品稀釋液

          1μg/L

          2號標準品

          150μl3號標準品加入150μl標準品稀釋液

          0.5μg/L

          1號標準品

          150μl2號標準品加入150μl標準品稀釋液

           

           

          1. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
          2. 溫育:用封板膜封板后置37溫育30分鐘。  
          3. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
          4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
          5. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
          6. 溫育:操作同3
          7. 洗滌:操作同5
          8. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘.
          9. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn))。
          10. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

          計算

            以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

          ELISA試劑盒注意事項

          1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

          2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

          3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

          1. 請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
          2. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

          6.底物請避光保存。

          7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

          8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

          9.本試劑不同批號組分不得混用。

          10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

          保存條件及有效期

          1.試劑盒保存:2-8

          2.有效期:6個月

           

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