首頁 > 技術(shù)文章 > 人(Human)柯薩奇B組病毒抗體IgG(CBV-IgG)ELISA 檢測試劑盒說明書

          人(Human)柯薩奇B組病毒抗體IgG(CBV-IgG)ELISA 檢測試劑盒說明書

          2014-03-25 [1291]

          人(Human)柯薩奇B組病毒抗體IgGCBV-IgGELISA 檢測試劑盒說明書

          本試劑僅供研究使用  標(biāo)本:血清或血漿

           

          試驗(yàn)原理

          CBV-IgG試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA.已知CBV-IgG濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將CBV-IgG和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物AB,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中CBV-IgG的濃度呈比例關(guān)系。

           

          試劑盒內(nèi)容及其配制

          試劑盒成份(2-8℃保存)

          96孔配置

          48孔配置

          配制

          96/48人份酶標(biāo)板

          1塊板(96T

          半塊板(48T

          即用型

          塑料膜板蓋

          1

          半塊

          即用型

          標(biāo)準(zhǔn)品:40IU/ml

          1瓶(0.6ml

          1瓶(0.3ml

          按說明書進(jìn)行稀稀

          空白對照

          1瓶(1.0ml

          1瓶(0.5ml

          即用型

          標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液

          1瓶(5ml

          1瓶(2.5ml

          即用型

          生物素標(biāo)記的抗CBV-IgG抗體

          1瓶(6ml

          1瓶(3.0ml

          即用型

          親和鏈酶素-HRP

          1瓶(10ml

          1瓶(5.0ml

          即用型

          洗滌緩沖液

          1瓶(20ml

          1瓶(10ml

          按說明書進(jìn)行稀釋

          底物A

          1瓶(6.0ml

          1瓶(3.0ml

          即用型

          底物B

          1瓶(6.0ml

          1瓶(3.0ml

          即用型

          終止液

          1瓶(6.0ml

          1瓶(3.0ml

          即用型

          標(biāo)本稀釋液

          1瓶(12ml

          1瓶(6.0ml

          即用型

           

          自備材料

          1. 蒸餾水。
          2. 加樣器:5ul10ul50ul100ul200ul500ul1000ul
          3. 振蕩器及磁力攪拌器等。

           

          安全性

          1. 避免直接接觸終止液和底物AB。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
          2. 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
          3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

           

          操作注意事項(xiàng)

          1. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
          2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
          3. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
          4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物AB液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
          5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
          6. 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
          7. 底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
          8. 加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
          9. 按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

           

          樣品收集、處理及保存方法

          1. 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
          2. 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
          3. 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
          4. 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
          5. 保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

           

          試劑的準(zhǔn)備

          1. 標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:

          40 IU/ml

          6號標(biāo)準(zhǔn)品)

          原倍濃度不用稀釋直接加入50ul

          20 IU/ml

          5號標(biāo)準(zhǔn)品)

          100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          10 IU/ml

          4號標(biāo)準(zhǔn)品)

          100ul5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          5.0 IU/ml

          3號標(biāo)準(zhǔn)品)

          100ul4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          2.5 IU/ml

          2號標(biāo)準(zhǔn)品)

          100ul3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          1.25 IU/ml

          1號標(biāo)準(zhǔn)品)

          100ul2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          0 IU/ml

          (空白對照)

          原始濃度不用稀釋直接加入50ul

           

          1. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

           

          操作步驟

          1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
          2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液11稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
          3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
          4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
          5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
          6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
          7. 每孔加入底物AB50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
          8. 取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
          9. 450nm波長處測定各孔的OD值。

           

          建議使用的實(shí)驗(yàn)方案

           

          標(biāo)準(zhǔn)品濃度(IU/ml

           

          A

          40

          40

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          B

          20

          20

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          C

          10

          10

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          D

          5.0

          5.0

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          E

          2.5

          2.5

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          F

          1.25

          1.25

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          G

          0

          0

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          H

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

          樣品

           

           

          局限

          6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。

           

          試劑盒性能

          1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990

          2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。

          3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%

           

          結(jié) 果 判 斷

          1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD

           

          2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的CBV-IgG標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的CBV-IgG含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

           

          3檢測值范圍:0-40IU/ml

           

          4、敏感度: 0.1 IU/ml

          主站蜘蛛池模板: 日本娇小xxxⅹhd成人用品| 欧美成人性色生活片| 中文字幕成人网| 2021国产成人午夜精品| 日韩精品无码成人专区| 成人免费v片在线观看| 国产成人久久久精品二区三区| 亚洲人成人一区二区三区| 成人午夜福利视频镇东影视| 国产成人精品a视频| 欧美日韩国产成人高清视频| 国产成人精品电影| 欧美成人片一区二区三区| 国产69久久精品成人看| 成人在线第一页| 久久亚洲国产成人精品无码区 | 国产成人午夜福利在线播放| 精品成人一区二区三区四区| 四虎国产成人永久精品免费| 成人爽爽激情在线观看| 久久久久亚洲AV成人片| 国产成人av在线影院| 成人免费视频软件网站| 亚洲AV成人无码网站| 亚洲综合成人网| 国产成人无码一区二区三区| 成人秋霞在线观看视频| 欧美成人在线网站| 草莓视频成人在线观看| 久久精品成人国产午夜| 亚洲精品国产成人片| 国产69久久精品成人看| 国产成人tv在线观看| 国产亚洲综合成人91精品| 国产成人8X视频网站入口| 免费看的成人yellow视频 | 国产成人午夜片在线观看| 国产成人综合美国十次| 国产成人精品999在线观看| 国产成人精品一区二三区在线观看 | 国产成人精品999在线观看 |