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          豬單核細胞趨化蛋白4(MCP-4)elisa試劑盒使用說明書

          2014-06-20 [1126]

          豬單核細胞趨化蛋白4(MCP-4)elisa試劑盒使用說明書
          本試劑盒僅供研究使用。
          檢測范圍: 96T
          10ng/L-350ng/L
          使用目的:
          本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關液體樣本中單核細胞趨化蛋白4(MCP-4)含量。
          實驗原理
          本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬單核細胞趨化蛋白4(MCP-4)水平。用純化
          的豬單核細胞趨化蛋白4(MCP-4)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中
          依次加入單核細胞趨化蛋白4(MCP-4),再與HRP 標記的單核細胞趨化蛋白4(MCP-4)
          抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在
          HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的
          單核細胞趨化蛋白4(MCP-4)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),
          通過標準曲線計算樣品中豬單核細胞趨化蛋白4(MCP-4)濃度。
          豬單核細胞趨化蛋白4(MCP-4)elisa試劑盒使用說明書試劑盒組成
          1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶
          2 酶標試劑6ml×1 瓶8 標準品(640ng/L) 0.5ml×1 瓶
          3 酶標包被板12 孔×8 條9 標準品稀釋液1.5ml×1 瓶
          4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份
          5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張
          6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個
          標本要求
          1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能
          馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
          2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
          操作步驟
          1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
          釋。
          320ng/L 5 號標準品150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
          160ng/L 4 號標準品150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
          80ng/L 3 號標準品150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
          40ng/L 2 號標準品150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
          20ng/L 1 號標準品150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
          2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、
          待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,
          然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
          量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
          3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
          4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
          5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此
          重復5 次,拍干。
          6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
          7. 溫育:操作同3。
          8. 洗滌:操作同5。
          9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
          15 分鐘.
          10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉)。
          11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止
          液后15 分鐘以內進行。
          操作程序總結:
          計算
          以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的
          OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD 值計算出標
          準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,
          即為樣品的實際濃度。
          注意事項
          1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
          用完,板條應裝入密封袋中保存。
          2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
          3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
          控制在5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
          4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD 值
          大于標準品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計
          算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
          5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
          6.底物請避光保存。
          7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
          8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
          9.本試劑不同批號組分不得混用。
          10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
          豬單核細胞趨化蛋白4(MCP-4)elisa試劑盒使用說明書保存條件及有效期
          1.試劑盒保存:;2-8℃。
          2.有效期:6 個月

           

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