ELISA試劑盒實驗常見問題及解決方法

ELISA試劑盒試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。現將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下，以期給同行帶來一些啟發，提高試驗質量。
下面分析ELISA試劑盒試驗操作中可能影響結果的原因，并給出相應的解決辦法。
一、選擇試劑
選擇質量優良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。二、加樣
可能原因：
1）血清或血漿標本分離不好即進行加樣；2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內溫度較高時）；3）加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法：
1）標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。2）加樣后及時放入孵箱。3）加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。4）如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。5）標本較多時，請分批操作。
三、孵育
可能原因：
1）孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發，吸附于孔壁，難于清洗*;2）孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。
解決辦法：
1）貼封片或加蓋；2）按說明步驟嚴格控制操作時間。
四、洗板
可能原因：
1）采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。2）采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*;洗板不暢，導致洗板效果差。3）反應板過多造成洗板等待時間長。
解決辦法：
1）保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；2）合理安排，或多用幾臺洗板機。
五、顯色
可能原因：
1）顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；2）加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
解決辦法：1）顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用；2）加樣時保持顯色劑不外流；3）A、B液應避免接觸金屬器械。
六、終止
可能原因如加終止液時產生較多氣泡，導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
七、讀板
如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸；盡可能實現ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質量。
在實際操作中，除了選擇優良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內質控、室間質評，以嚴謹的工作作風檢測每一份標本，才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀，這對于實現ELISA試劑盒標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。