人癌胚抗原（CEA）elisa試劑盒說明書

人癌胚抗原(CEA)elisa試劑盒說明書
【原理】
    利用雙抗體夾心技術，將抗CEA的單克隆抗體包被于聚苯乙烯塑料珠上，制成固相抗體珠，用此珠去吸附樣品中的CEA，充分洗滌后再依次與酶標記CEA抗體與底物反應，以成色后的吸光度值從劑量反應曲線查得樣品中的cEA含量。
【試劑】
    1.CEA標準液 用純化CEA配制為濃度分別為0、1.5、3.0、10.0、20.ong/ml系列標準液。
    2.CEA抽提液0.Zmol/L醋酸鈉緩沖液(pHS.0)。
    3.基質應用液取鄰苯二胺80mg溶于pHS.O磷酸一拘攤酸緩沖液50ml中，56℃水浴中助溶。*溶后加人新鮮的30%HZ認20川，混勻。此基質液呈無色透明液體，若顯不能使用。將此底物液貯于棕色瓶中，30而n內用完。
    4.辣根過氧化物酶(HRP)標記的抗CEA抗體。
    5.洗滌液0.osmol/LP贅(pH7.40)一0.1%Tween一20.
    6.抗CEA單克隆抗體包被的圓珠.
    7.待檢血樣血清(漿)。
人癌胚抗原(CEA)elisa試劑盒說明書【操作步驟】
    1.待檢抗原的制備取待檢血清或血漿0.sml，加0.Zmol/L醋酸鈉緩沖液
(pHS.o)1.oml，混勻后于70℃水浴內15min。以3 000r/而n離心10而n。取上清液作
為3倍稀釋的待檢抗原。陽性對照品必須同步處理。
    2.在20孔反應板上每孔中加人上述(*步操作)待檢抗原0.Zml。同時加人
CEA標準抗原及陽性對照抗原。每份樣品均作平行兩孔。
    3.用鑷子夾起CEA固相抗體珠，甩掉附著的液體后投人孔內。反應板上班蓋一張
干凈紙，將板漂浮于37℃水浴中反應Zh。注意勿蓋水箱蓋，反應完成后可連續操作或
置4℃。
    4.用PBS一Tween一20洗滌液洗滌3次。每次加入洗滌液后放置3而n再抽凈(負壓抽吸)洗液。zui后一次洗液放人后靜置至準備加酶標記抗CEA之前時再抽凈。
    5.二抗液制備 取每支凍干的酶標記抗CEA抗體用蒸餾水1.Oml溶解，因凍干時加有明膠保護劑，溶解時須放置37℃水浴中lmin。待充分溶解后再按要求稀釋至zui適工作濃度。
    6.將孔中洗滌液抽凈，每孔加人酶標記抗CEA工作液0.Zml，將反應板用干凈紙覆蓋后再漂浮于37℃水浴中反應2h，勿蓋水箱蓋。
    7.用PBS一Tween一20洗液洗滌4~5次。末次洗液放人后靜里至加基質液前。
    8.將孔中洗液抽凈，把反應板與裝有75mmX12mm試管的20孔紙盒按編號對好位置，翻轉反應板使扣在紙盒上，將圓珠對號移人紙盒上的試管中，每管加人新鮮配制的底物應用液0.3ml。另取一支干凈試管加基質應用液。.3ml，供測定吸光度時調零使用。避光，室溫中反應30min。
    9.每管加人lmol/L HCI 2.0ml終止反應.
    10.于492nm波長處，1.0cm比色皿用空白管調零，測定吸光度(應于終止反應lh內完成)。
【參考范圍】
    正常成人(96%~97%)血清CEA含量<2.5拌g/L;
    大量吸煙者(20%~40腸)>2.5拌g/L，有的甚至>5拌盯Lo
【注意事項】
    1.由于CEA提純和單克隆抗體制備的技術很復雜，目前臨床上多購買廠家生產的試劑盒進行測定.不同廠家生產的CEA診斷試劑，由于方法學及抗血清特異性的差異，測定值可能會有差別。不同批號的試劑嚴禁混合使用。試劑盒應4℃存放，并避免強光照射。
    2.20孔反應板及試管使用后，反應板可用洗板機清洗;也可用水洗凈，后浸泡于硫酸一鉻酸洗液中，再經自來水、蒸餾水沖洗干凈，干燥后可再次使用。
    3.基質液配制與使用過程中，禁與金屬物品或其他氧化物接觸，不得使用塑料容器。
    4.受檢血清應新鮮，避免反復凍融。
人癌胚抗原(CEA)elisa試劑盒說明書【臨床意義】
    1.測定胃液和唾液的CEA對胃癌的診斷較有意義。胃液中的CEA含量一般高于血清中含量的1.5~15.5倍，而且較血中CEA升高較早。如果血中CEA在高水平上波動，而胃血CEA比值>1，則有利于胃癌的診斷，預后不良。唾液中的CEA更高于胃液，唾液CEA顯著升高時與胃癌診斷的符合率高達90%.
    2.CEA是各臟器癌的廣譜腫瘤標記物，特異性差，無助于各種腫瘤的早期診斷，但有助于鑒別腫瘤的良性和惡性。CEA測定可作為腫瘤手術成敗的檢測指標，對腫瘤的復發、轉移及預后判斷有一定的價值。
    3.高濃度的血清CEA含量與結腸癌相關，但無早期診斷價值。CEA升高也見于腸梗阻、膽道梗阻、尿毒癥、胰腺炎、肝硬化、結腸或直腸息肉、潰瘍性結腸炎、局限性腸炎和潰瘍病。