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          豬旋毛蟲(Trichinella)ELISA試劑盒使用方法

          2015-02-09 [1879]

          豬旋毛蟲(Trichinella)ELISA試劑盒使用方法操作步驟
          編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
          加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,

          溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
          配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
          洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
          加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 
          溫育:操作同3。
          洗滌:操作同5。
          顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
          終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn))。
          測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
          計算和結(jié)果判定:

            試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

            臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

            陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為旋毛蟲(Trichinella)陰性

            陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為旋毛蟲(Trichinella)陽性


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