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          大鼠內(nèi)皮素酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

          2015-06-03 [1142]

          大鼠內(nèi)皮素1(ET-1)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

          使用目的

          本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中內(nèi)皮素1(ET-1)含量。

          實驗原理

          大鼠內(nèi)皮素酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠內(nèi)皮素1(ET-1)水平。用純化的大鼠內(nèi)皮素1(ET-1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入內(nèi)皮素1(ET-1),再與HRP標記的內(nèi)皮素1(ET-1)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的內(nèi)皮素1(ET-1)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠內(nèi)皮素1(ET-1)濃度。 

          試劑盒組成 

          1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶

          2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品(400μg/L) 0.5ml×1瓶

          3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶

          4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份

          5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張  

          6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個

          標本要求 

          1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

          2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

          操作步驟

          1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

          200μg/L 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

          100μg/L 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

          50μg/L l 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

          25μg/L 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

          12.5μg/L 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

          2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

          3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

          4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

          5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

          6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 

          7. 溫育:操作同3。

          8. 洗滌:操作同5。

          9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

          10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn))。

          11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

          計算

          以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。 

          注意事項

          1.大鼠內(nèi)皮素酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

          2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

          3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

          4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

          5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

          6.底物請避光保存。

          7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

          8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

          9.本試劑不同批號組分不得混用。

          10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

          保存條件及有效期

          1.試劑盒保存:;2-8℃。

          2.有效期:6個月

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