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          分析小鼠1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)酶聯免疫試劑盒范圍

          2015-07-20 [2075]

                  小鼠1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書
          本試劑盒僅供研究使用。
          檢測范圍:
          96T
          1.2ng/ml - 45ng/ml
          使用目的:
          本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中 1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)含量。
          小鼠1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)ELISA試劑盒實驗原理
          本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠 1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)
          1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入  1,4,5-
          三磷酸肌醇(IP3),再與 HRP標記的1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)抗體 ,形成抗體-抗原-酶標抗用純化的小鼠體復合物,經過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的 1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值)通過標準曲線計算樣品中小鼠 1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)濃度。
          小鼠1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)ELISA試劑盒標本要
          1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能
          馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
          2.不能檢測含NaN3的樣品,因   NaN3抑制辣根過
          (HRP)活性。
          操作步驟
          1.  標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
          釋。
          40ng/ml
          20ng/ml
          10ng/ml
          5ng/ml
          5號標準品
          4號標準品
          3號標準品
          2號標準品
          1號標準品
          150μl的原倍標準品加入  150μl標準品稀釋液
          150μl的  5號標準品加入  150μl標準品稀釋液
          150μl的  4號標準品加入  150μl標準品稀釋液
          150μl的  3號標準品加入  150μl標準品稀釋液
          150μl的  2號標準品加入  150μl標準品稀釋液
          2.5ng/ml
          2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、
          待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,
          然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
          量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
          溫育:用封板膜封板后
          37℃溫育30分鐘。
          30倍稀釋后備用
          配液:將 30倍濃
          洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜
          重復 5次,拍干。
          30秒后棄去,如此
          加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
          溫育:操作同 3。
          洗滌:操作同 5。
          顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
          10分鐘.
          10.終止:每孔加終止液    50μl,終止反應(此時藍色立轉)。
          11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止液后 15分鐘以內進行。
          計算
          以標準物的濃度為橫坐標, OD值為縱坐標,在坐標紙上,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與  OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
          小鼠1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)ELISA試劑盒注意事項
          1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
          2.濃洗滌液可能會有
          析出,稀釋時可在浴中加溫助溶,洗滌時不影響
          3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
          控制在 5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
          4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本  OD值
          大于標準品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計
          算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
          5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉
          6.底物請避光保存。
          7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗
          8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
          9.本試劑不同批號組分不得混用。
          小鼠1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)ELISA試劑盒保存條件及有效期
          1.試劑盒保存:;2-8℃。
          2.有效期:6個月

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