人ELISA試劑盒的解決的辦法

    因此有些廠家為了保持較好的本底采用了單片段基因工程抗原及合成肽包被，該類試劑盒的流行病學敏感度不夠，人們往往以反應本底的好壞來衡量人ELISA試劑盒反應試劑盒，穩(wěn)定性也成問題。值得欣慰的是也有廠家堅持試劑盒高的流行病學敏感度，科學得對待反應結果。本文就標本因素對人ELISA試劑盒測定的影響做如下討論。
    血清是zui常用的人ELISA試劑盒標本，血漿一般可視為與血清同等的標本，標本引起的假陽性和假陰性結果主要是干擾性物質所致，分為內源性物質和外源性物質兩種：
1． 內源性物質 有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質，可以不同程度影響檢測結果。常見的干擾物質有：類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導的抗鼠Ig (s)抗體、交叉反應物質和其它物質等。
（1）類風濕因子
人血清中IgM、IgG型類風濕因子（RF）可以與人ELISA試劑盒系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結合，從而導致假陽性。
解決該情況的辦法是：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標本用聯(lián)有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效）；③檢測抗原時，可以用2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中，使RF降解。
（2）補體 ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標記二抗過程中，人ELISA試劑盒抗體分子發(fā)生變構，其FC段的補體C1q分子結合位點被暴露出來，使C1q 可以將二者連接起來，人ELISA試劑盒從而造成假陽性。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
（3）嗜異性抗體 人類血清中含有能與嚙齒類動物（如鼠等）Ig (s) 結合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來，也能造成假陽性。解決的辦法是：可在標本稀釋液中加入過量的動物Ig (s) ，但加入量不足或亞類不同時無效。
（4）嗜靶抗原的自身抗體 抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時能與靶抗原結合形成復合物，在人ELISA試劑盒方法中均可干擾抗原抗體測定結果。為避免以上情況出現(xiàn)，測定前需用理化方法將其解離后再測定。