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          犬B細(xì)胞淋巴瘤因子試劑盒

          2015-09-15 [1232]

          犬B細(xì)胞淋巴瘤因子試劑盒
          該試劑盒以 HRP標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物(HRP Streptavidin Conjugate,HRP-SA)為基礎(chǔ),可用于檢測(cè)細(xì)胞、組織B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、特異性強(qiáng)、定性定位    、背景清晰。在所用的B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)一抗與相應(yīng)靶抗原抗原。該試劑盒,用生物化二抗與一抗特異性,zui后加 HRP-SA,形成抗原—特異一抗—生物素化二抗—HRP-SA復(fù)合物,顯微鏡下觀察成像。 
          試劑盒所含試劑:
          試劑A 通透液:0.1% Triton-X 100   10 mL(選用) 
          試劑B 2瓶封閉
          試劑C (*分裝)已稀釋的即用型bcl-2一抗(2.5ml) 
          試劑D (*分裝)生物素化       IgG 1支 
          (濃度1.5 mg/mL,稀釋     1:300~1:500)50 μL+抗體稀釋液20ml 
          (封閉用) 10ml/瓶 
          試劑E  HRP-SA復(fù)合物1支(濃度1 μM,稀釋     1:50~1:200)100 μL 
          試劑F  DAB顯色液 5ml 
          用戶自備試劑:
          1. 10mM TBS(pH7.2~7.4) 
          犬B細(xì)胞淋巴瘤因子試劑盒

          加蒸餾  800mL,濃鹽酸調(diào)pH值至7.2~7.4,zui后定容至1000mL TBS-T:TBS+Tween 20(0.05%體積) 
          2.抗原修復(fù)液(依檢測(cè)抗原不同而選擇不同的修復(fù)液) 
          10mM pH6.0 檸檬酸
          檸檬酸0.38g 
          檸檬酸三鈉2.45g 
          加蒸餾  900mL,濃鹽酸調(diào)pH值至6.0,zui后定容至1000mL 
          或:0.5M EDTA修復(fù)液(pH8.0) 
          EDTA·2H2O 186.1g 
          檸檬酸三鈉2.45g 
          加蒸餾  700mL,用10mM NaOH調(diào)pH值至8.0,zui后定容至1000Ml . 
          10 mL 
          4. Tween 20 5 mL 
          石蠟包埋組織切片
          實(shí)驗(yàn)步驟(建議方案):
          石蠟包埋組織切片3~4μm 厚度 
          1.烤片: 將待做切片,于60℃恒溫烤箱中至少烤1 hr; 3次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
          2.脫蠟: 切片放10 min; 
          3.    : 切片經(jīng)下行酒精    ,無乙醇2 min;75%乙醇2min,自來5min,95%乙醇2次(每次2min),85%,ddH2O洗2×2min; 
          4.抗原修復(fù): 根據(jù)抗體說明書推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù),常采用高壓、微波(溫度達(dá)到98~100℃)或酶消化修復(fù)法,室溫自然    ,自來2min,TBS洗滌(2×2min)(5步封閉。 
          5.封閉: 滴加試劑B,37℃濕盒孵育30 min; ,ddH2O洗2×1)* 注:有些抗原勿需修復(fù),
          直接進(jìn)
          6.加一抗:滴加用試劑C(即用型一抗),37℃濕盒孵育2 hr 或4℃夜; 
          7.洗滌: TBS-T洗滌(3×5 min); 
          8.封閉: 滴加試劑B,37℃濕盒孵育10 min; 
          9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑D),37℃濕盒中孵育30 min; 
          10.洗滌: TBS-T洗滌(3×5 min); 
          11.封閉: 滴加試劑Tween 20,37℃濕盒孵育封閉20 min; 
          12.加HRP-SA: 滴加用試劑C稀釋的試劑E(1:50~200,終濃度5~20 nM),37℃濕盒中孵育30 min; 
          13.洗滌: TBS-T洗滌(3×5 min),TBS洗滌(2×5 min); 
          14.顯色:應(yīng)用DAB溶液(試劑F)顯色; 
          15.復(fù)染:自來,復(fù)染,脫  ,透明; 
          16.封片: 待組織標(biāo)本干后,用試劑
          17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。 封片; 

          注意事項(xiàng):犬B細(xì)胞淋巴瘤因子試劑盒
          1. 修復(fù)后,自來,驟。 

          2. ,用過的檸檬酸用。 
          3. 若試劑為微量濃    ,用前應(yīng)低速離心,將。
          4. 封片前一定要換用TBS ,以便洗去組織上殘留的Tween 20,否則會(huì)影響。 
          5. 如須復(fù)染細(xì)胞核,則在封片前復(fù)染或直接采用含有染核試劑的封片劑進(jìn)行封片。 
          附1:
          抗原修復(fù)方法
          常用抗原修復(fù)液:檸檬酸9.0)等等。 (0.01M pH6.0)、EDTA 抗原修復(fù)液(pH8.0 或,在組織上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶,37℃孵育。 ,將脫蠟
          一、酶消化修復(fù)法切片脫蠟,TBS20~30min后TBS
          二、微波抗原修復(fù)法
          微波盒中加切片架上,放,中檔或10~15min,取出微波盒,自來,取出切片。因不同微波爐微波處理時(shí)間存在差異,須自行調(diào)整。 
          三、直接高壓抗原修復(fù)法
          取修復(fù)液于不銹鋼高壓鍋中加熱至    ,將組織切片,修復(fù)液然,蓋上鍋蓋,待噴1.5~2.5min即可脫離熱源,自,取出切片。此方法適用于較難檢測(cè)或核抗原的修復(fù)。
          四、隔不銹鋼高壓鍋中加自來騰,將切片放,微波盒中加,待噴4~8 min即可,自然,取出切片。此方法適用于較難檢測(cè)或核抗原的修復(fù)。 


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