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          雞病(DEV)酶聯免疫分析試劑盒使用

          2016-04-26 [1413]

          雞病(DEV)酶聯免疫分析試劑盒使用
          標本要求
          1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能
          馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
          2.不能檢測含NaN3的樣品,因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
          操作步驟
          1.  編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照  2孔、陽性對照  2孔、空白對照   1
          孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
          2.  加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照    50µl。然后在待測樣品孔先
          加樣品稀釋液  40µl,然后再加待測樣品  10µl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不
          觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
          3.  溫育:用封板膜封板后置  37℃溫育30分鐘。
          4.  配液:將  30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用
          5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置  30秒后棄去,如此
          重復 5次,拍干。
          6.  加酶:每孔加入酶標試劑  50µl,空白孔除外。
          溫育:操作同 3。
          洗滌:操作同 5。
          顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
          15分鐘.
          10.終止:每孔加終止液    50µl,終止反應(此時藍色立轉)。
          11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止
          液后 15分鐘以內進行。
          操作程序總結:
          計算和結果判定:
          試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.10
          臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
          陰性判定:樣品 OD值<臨界值(CUT    OFF)者為傳染性法氏囊病毒抗體(IBDV-Ab)
          陰性
          陽性判定:樣品 OD值≥臨界值(CUT    OFF)者為傳染性法氏囊病毒抗體(IBDV-Ab)
          陽性
          注意事項
          1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
          2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
          用完,板條應裝入密封袋中保存。
          3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
          4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
          5.底物請避光保存。
          6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為  630nm
          7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M的硫酸,使用時必須
          注意安全。
          保存條件及有效期
          1.試劑盒保存:;2-8℃。
          2.有效期:6個月

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