雞病（DEV）酶聯免疫分析試劑盒使用

雞病(DEV)酶聯免疫分析試劑盒使用
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.  編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照  2孔、陽性對照  2孔、空白對照   1
孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2.  加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照    50µl。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液  40µl，然后再加待測樣品  10µl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不
觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3.  溫育：用封板膜封板后置  37℃溫育30分鐘。
4.  配液：將  30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置  30秒后棄去，如此
重復 5次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶標試劑  50µl，空白孔除外。
溫育：操作同 3。
洗滌：操作同 5。
顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10.終止：每孔加終止液    50µl，終止反應（此時藍色立轉）。
11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止
液后 15分鐘以內進行。
操作程序總結：
計算和結果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.10
臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品 OD值<臨界值（CUT    OFF）者為傳染性法氏囊病毒抗體（IBDV-Ab）
陰性
陽性判定：樣品 OD值≥臨界值（CUT    OFF）者為傳染性法氏囊病毒抗體（IBDV-Ab）
陽性
注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存。
6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為  630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M的硫酸，使用時必須
注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月