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          常用染料和試劑的配制與使用

          2010/7/2 [1415]

          1. 碘-硫酸法
            植物細(xì)胞細(xì)胞壁的主要成分是纖維素,纖維素被硫酸水解后,遇碘呈藍(lán)色反應(yīng)。因此用碘-硫酸法可鑒定細(xì)胞壁的成分。
            試劑配制方法:
            1% 碘液 將1.5 克碘化鉀溶于100 毫升的蒸餾水中,待*溶解后,加入1 克碘,震蕩溶解。
            66.5% 硫酸 7 份濃硫酸加入3 份蒸餾水配制而成。配制時(shí)要將濃硫酸慢慢地加入水中,并不斷地用玻璃棒攪拌,否則會(huì)因急劇發(fā)熱,而使容器炸裂。
            2. 蘇丹Ⅲ反應(yīng)
            蘇丹Ⅲ可將細(xì)胞中脂肪、栓質(zhì)、角質(zhì)染為桔紅色,因此可用此染料顯示出上述物質(zhì)在細(xì)胞中的分布和位置。
            配制方法:將蘇丹Ⅲ (或蘇丹Ⅳ)染料0.1 克,溶于10 毫升95% 酒精中,然后加入10 毫升甘油。
            3. 間苯三酚反應(yīng)法
            間苯三酚反應(yīng)是植物顯微化學(xué)中確定木質(zhì)化細(xì)胞壁的zui常用和zui簡(jiǎn)單的方法。這一反應(yīng)的原理是當(dāng)間苯三酚在酸性環(huán)境下與細(xì)胞壁中的木質(zhì)素相遇時(shí),發(fā)生櫻桃紅色或紫紅色反應(yīng)。其方法是將要鑒定的切片先用一滴1mol/L
            鹽酸浸透(間苯三酚要在酸性環(huán)境下才能與木質(zhì)素起作用),然后滴一滴5-10% 間苯三酚的85% 酒精溶液,木質(zhì)化的細(xì)胞壁即發(fā)生顏色反應(yīng)。
            4.碘液測(cè)試淀粉法
            淀粉遇碘呈藍(lán)色反應(yīng),它是鑒定淀粉的zui常用方法。
            碘液配制方法:將2 克碘化鉀放入5 毫升蒸餾水中,加熱使其*溶解;然后加入1克碘,*溶解后用蒸餾水稀釋至300
            毫升,放入具有毛玻璃塞的棕色玻璃瓶中,置于暗處保存。
            測(cè)定淀粉時(shí),可將上述溶液稀釋2-10 倍,使染色不致過(guò)深,效果更好。
            5. 壓片法常用的染料
            (1) 醋酸洋紅 為壓片法中zui常用的染料。
            配制方法是:先將100 毫升45% 醋酸水溶液放于燒瓶中煮沸,移去火焰,停止加熱。然后緩慢加入1 克洋紅粉末,全部加入后再煮沸1-2
            分鐘。此時(shí)可將一枚生銹鐵釘用棉線懸入溶液中約1 分鐘后取出(鐵為媒染劑)。靜置12 小時(shí)后經(jīng)過(guò)過(guò)濾,放入磨口玻璃塞棕色瓶中保存?zhèn)溆谩?br />  (2) 石炭酸---品紅 為近年創(chuàng)用的一種優(yōu)良核染色劑,將細(xì)胞核和染色體染為紅紫色,細(xì)胞質(zhì)一般不著色,背景清晰。
            其配制方法有二:
            配方Ⅰ:
            原液A:取3 克堿性品紅溶于100 毫升的70%酒精中(此液體可長(zhǎng)期保存)。
            原液B:取10 毫升原液A,加入90 毫升5% 的石炭酸(酚)水溶液中(可保存兩周)。
            染色液:取55 毫升原液B 加6 毫升冰醋酸和6 毫升37% 甲醛。
            此染色液因含有較多的甲醛,可使原生質(zhì)體硬化,而能保持其固有的形態(tài)。但也因此不易使組織軟化,因而不太適用于植物組織的染色體壓片染色(本染色液適于植物原生質(zhì)體培養(yǎng)中使用)。在此基礎(chǔ)上加以改進(jìn)的配方Ⅱ,則可普遍地用于一般植物組織的染色體壓片的染色。
            配方Ⅱ:
            取配方Ⅰ中的染色液20 毫或加80 毫升45% 醋酸和1.8 克山梨醇。
            染色液配制后為淡品紅色,如立即使用染色較淺。放置2 周后,染色能力顯著增強(qiáng),而且放置時(shí)間越久,染色效果越好。
            6.鉻酸-硝酸離析法
            為了觀察一個(gè)細(xì)胞完整的立體形態(tài)結(jié)構(gòu),可以用一些化學(xué)藥品把細(xì)壁中的中層物質(zhì)(果膠質(zhì))溶解,使細(xì)胞分離散開(kāi),便于觀察。
            離析前先把材料洗凈,用刀切成1-2 毫米寬的狹條(如葉片)或切成火柴棍粗細(xì)的長(zhǎng)約1
            厘米的小條(如根或莖)。然后把切好的材料放進(jìn)小玻璃瓶中,加入離析液(加入量約為材料的20 倍),塞緊瓶塞,放于30-40℃
            溫箱中。浸漬時(shí)間因材料性質(zhì)而異,葉片和幼嫩的根莖組織3-4
            小時(shí)即可,而有些次生結(jié)構(gòu)(如木質(zhì)部)則需要更長(zhǎng)的時(shí)間。離析情況應(yīng)隨時(shí)檢查,檢查的方法是取少許離析材料,放在載玻片上,加一滴水,蓋上蓋玻片,然后用解剖針輕輕敲打,如果材料分離則表明浸漬時(shí)間已夠。浸漬時(shí)間超過(guò)一天以上時(shí),應(yīng)更換離
            析液一次。離析時(shí)間已夠的材料,用水洗凈后放入70% 酒精中保存。
            離析液配方:
            10% 鉻酸 1份
            10%硝酸 1 份
            兩種溶液應(yīng)在使用時(shí)才混合,混合均勻后再使用。

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