培養基制備原則和要求

培養基制備原則和要求

（一）培養基必須含有細菌生長繁殖所需要的營養物質。所用的化學藥品必須純凈，稱取的份量務必準確。
（二）培養基的酸堿度應符合細菌生長要求。按各種培養基要求準確測定調節pH值。多數細菌生長的適宜pH值為7.2～7.6，呈弱堿性。
（三）培養基的滅菌時間和溫度，應按照各種培養基的規定進行，以保證滅菌效果及不損失培養基的必需營養成分。培養基經滅菌后，必須置37℃溫箱中培養24小時，無菌生長者方可應用。

（四）所用器皿須潔凈，忌用鐵或鋼質器皿，要求沒有抑制細菌生長的物質存在。
（五）制成的培養基應該是透明的，以便觀察細菌生長性狀以及其他代謝活動所產生的變化。
二、培養基制備過程
不同的培養基其制備方法也不同，一般包括以下步驟：
（一）準確稱量試劑 根據不同的菌類和用途，選擇適宜的培養基，培養基所需試劑必須純凈。
（二）校正pH值 將稱量好的培養基各種成分放入容器內，標記劃線，加熱溶解，補充水分，測定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計測定。用1N
NaOH和1N HCl調節pH值到適宜范圍內。
（三）過濾 將玻璃漏斗置鐵架上，再用紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養基倒入其中過濾至透明。
（四）分裝 將過濾后的培養基分裝于中試管或三角瓶內（試管內每支裝5mL；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包扎好，準備滅菌。
（五）滅菌
培養基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養細胞在水中煮沸后即被殺死，但細菌的芽胞有較強的抗熱性，須經高壓蒸汽滅菌才能達到*滅菌的目的。根據蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。因此，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下，菌體吸收水分后，其蛋白質易于凝固變性，因為蒸汽的穿透力強，殺菌效果好。

高壓蒸汽滅菌，一般采用15磅／平方（即1.05kg／cm2）壓力，此時的溫度是121.3℃。滅菌20～30分鐘后，可達到*滅菌的目的。在進行滅菌的時候，首先要把滅菌鍋內的冷空氣排出，否則，冷空氣存在會降低鍋內的實際溫度，影響滅菌效果。