細胞培養需注意的5個問題

細胞培養需注意的5個問題

一、促生長因子及激素

各種激素、生長因子對于維持細胞的功能、保持細胞的狀態（分化或未分化）具有十分重要的作用。有些激素對許多細胞生長有促生長作用，如胰島素，它能促進細胞利用葡萄糖和氨基酸。有些激素對某一類細胞有明顯促進作用，如氫化可的松可促進表皮細胞的生長等。

二、營養成分

維持細胞生長的營養條件一般包括以下幾個方面：
1.氨基酸：是細胞合成蛋白質的原料。所有細胞都需要12種必須氨基酸，此外還需要谷氨酰胺，它在細胞代謝過程中有重要作用，所含的氮是核酸中嘌令和嘧啶合成的來源。
2.單糖：培養中的細胞可以進行有氧與無氧酵解，細胞對葡萄糖的吸收能力zui高，半乳糖zui低。體外培養動物細胞時，幾乎所有的培養基或培養液中都以葡萄糖作為必含的能源物質。
3.維生素：主要扮演輔酶、輔基的角色，*。
4.無機離子與微量元素：細胞生長除需要鈉、鉀、鈣、鎂、氮和磷等基本元素，還需要微量元素，如鐵、鋅、硒等。

三、滲透壓

細胞必須生活在等滲環境中，大多數培養細胞對滲透壓有一定耐受性。人血漿滲透壓290mOsm/kg, 可視為培養人體細胞的理想滲透壓。對于大多數哺乳動物細胞，滲透壓在260－320mOsm/kg的范圍都適宜。

四、無毒、無污染的微環境

體外生長的細胞對微生物及一些有害有毒物質沒有抵抗能力，因此培養基應達到無化學物質污染、無微生物污染（如細菌、真菌、支原體、病毒等）、無其他對細胞產生損傷作用的生物活性物質污染（如抗體、補體）。
 

五、pH值

動物細胞大多數需要輕微的堿性條件，pH值約在7.2-7.4在細胞生長過程中，隨細胞數量的增多和代謝活動的加強，二氧化碳不斷被釋放，培養液變酸，PH值發生變化。由于NaHCO3容易分解為二氧化碳，很不穩定，致使緩沖系統難以地控制。合成培養基中使用了NaHCO3-CO2緩沖系統，并采用開放培養，使細胞代謝產生的CO2及時溢出培養瓶，再通過穩定調節溫箱中CO2濃度（5％），與培養基中的NaHCO3處于平衡狀態。