ELISA試劑盒使用說明書

ELISA試劑盒使用說明書
ELISA試劑盒質量保證是一個復雜的過程，許多重要的環節都影響到檢測的質量：

一、操作因素對ELISA結果的影響ELISA操作步驟復雜，操作不當將引起較大的誤差。以下敘述各個步驟中的影響因素。

1.加樣

2.溫育

3.洗滌

4.顯色

5.比色

二、灰區的設置通常情況下，ELISA定性實驗以“陽性"和“陰性"來報告結果，兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值"（cut-off value，CO值），這是定性免疫測定結果報告的依據。

三、標本復查ELISA手工檢測過程復雜，影響因素較多，即使室內質控在控，也可能因孔間差異而造成結果的差異，因此加大復查力度是保證結果準確性的可靠方法，比如對HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項目的可疑、弱陽性標本及少見模式的檢測結果進行復查。

四、結果判斷和報告常用下列幾種方法表示結果：

1.定性測定

2.半定量測定 結果一般以滴度表示。

3.定量測定 即用已知量的標準品作一系列稀釋后進行ELISA測定，繪制標準曲線，結果以量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應板都必須繪制相應的標準曲線。

4.結果報告

五、操作步驟：用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法

1. 包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。

2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

3. 加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。5. 終止反應

6. 結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。