ELISA試劑盒法與金標層析法檢測HIV抗體的適用性探討

目前，檢測HIV抗體常用的初篩方法有金標層析法和ELISA法。由于ELISA試劑盒法實驗時間較長，對設備、工作環境、實驗人員操作要求相對較高，因此中、小型以及偏遠地區的實驗室難以全面開展，而金標層析法具有操作簡單、快速等優點已被很多醫療單位用來進行HIV抗體初篩。但在試劑的檢測診治當中，由于HIV抗體初篩結果與確認結果不符而引發的醫療糾紛時有發生，因此根據不同的醫療環境和單位選擇合適的檢測方法十分重要。本文對用兩種方法檢測HIV抗體初篩陽性的結果與確認結果進行分析比較，旨在探討金標層析法與ELISA法檢測HIV抗體在實際工作中的適用性，為合理選擇實驗方法提供理論基礎。

1  資料與方法

    1.1  一般資料  

所有血液樣本均來自醫院2005年門診和住院病人，共1208例，其中男648例，女560例，年齡0.5～90歲，平均39歲。用ELISA法和金標層析法同時檢測其HIV抗體，所有樣本均在采樣后4h內檢測完畢。

    1.2  方法

    1.2.1  金標層析法  采用雙抗原夾心法原理，10～30min內觀察結果。

1.2.2  ELISA法  利用雙抗原夾心法，操作步驟嚴格按ELISA試劑盒說明書進行。

1.3   試劑  

兩種方法均使用上海伊麗薩生物科技有限公司生產的試劑，該試劑經國家藥檢所批，批檢合格，且都在有效期內（ELISA法試劑批號分別為：2005036601、2005056602、2004126608，金標層析法試劑批號分別為：2005040304、2005052501、2005011905）。

    1.4  儀器  洗板機Anth.s Fludo；酶標儀Anth.s 2010。

    1.5  統計學分析  檢測結果采用χ2檢驗進行數據處理，以P<0.05為差異有顯著性。

2  結果

    對兩種方法檢測結果進行分析比較， ELISA試劑盒與金標層析法檢測HIV抗體的結果經統計顯示差異無顯著性（χ2=0.65；P>0.05）

3  討論

    自1985年我國報道*例艾滋病以來［1］，艾滋病在我國的流行趨勢日趨嚴峻，近幾年更是進入一個快速增長期［2］。到目前為止，艾滋病尚無有效的治療措施，因此，對可疑人群的檢測和篩查顯得尤為重要。

    近年，艾滋病的檢測手段被不斷更新和利用。自20世紀70年代，Fanlk等建立了ELISA技術后［3］，該技術便廣泛用于臨床免疫檢測。用于檢測艾滋病的ELISA法第三代試劑，采取雙抗原夾心法原理，利用酶催化底物反應的放大作用［3］，用來提高特異性抗原抗體反應的敏感性。其特點為特異性和靈敏度高、準確性好。而金標層析法是繼ELISA法之后發展起來的一種膜固相免疫測定，其以膠體金作為標記物，利用層析作用來檢測抗原或抗體［4］。用于檢測HIV抗體金標層析法現在已廣泛使用于臨床和各醫療機構。該方法操作簡便、快速，無需特殊設備，通過實驗檢測結果發現，兩種方法均有較高的靈敏度，金標法陽性的11例標本用ELISA法檢測有4份標本陰性、7份標本陽性，但兩者差異無顯著性（P>0.05），均可適用于醫學檢測。然而在實際的臨床試驗中，選用HIV抗體初篩試劑時，應視不同情況而定。如本實驗的檢測結果中，11例金標法初篩陽性的樣本，經省CDC確認7例為陽性，7例ELISA法檢測陽性的樣本經省CDC確認均為陽性?？梢?，ELISA法的特異性高于金標層析法，有較高的陽性預期值。而金標層析法存在較高的假陽性率，其產生的原因多數還不清楚，排除技術因素外，可能主要是因為金標法受實驗條件和時間的限制，與ELISA試劑在制作技術上還存在一定的差異，還有一些針對HLA抗原的抗體、患者自身免疫性疾病、寄生蟲、其他病毒以及高丙種球蛋白癥病人的血清標本也常容易出現假陽性反應［1］。

    在醫院就診的過程中，因HIV-Ab初篩陽性而確認實驗陰性導致的醫療糾紛時有發生。因患者不理解或醫患之間溝通不夠，勢必給醫院的醫療服務質量和醫療形象造成負面影響，也給受檢者造成巨大的精神壓力和恐慌心理。因此選用一種特異性高、有較高的陽性預期感、能zui大限度保證發現真正HIV感染者的試劑尤為重要，ELISA試劑即具有以上優點。所以大、中型醫院在進行HIV-Ab初篩時，除急需手術或輸血的病人用金標層析法外，其余標本應盡量采用ELISA試劑盒法，以降低假陽性率，減少醫患糾紛，其他如進行艾滋病流行病學監測［1］，對特定人群HIV感染狀況和發展趨勢進行無關聯和匿名調查與檢測；對流行病學、臨床、病毒學或HIV相關的研究對象進行自愿檢測時也應該選擇特異性高的ELISA試劑。金標試劑可能由于本身反應條件的限制，其質量還有待進一步提高，但該方法簡便、快速、檢測敏感度高、假陰性率低，可適合街頭獻血員篩選的大批量檢測，經濟合算，獻血者也樂意接受，可使無償獻血的血液合格率得到明顯提升，對提高血液質量、保障輸血安全、減少血液浪費、進一步推廣無償獻血工作起到了積極作用。金標試劑還具有易于保存（環境溫度為2～30℃）、儲存時間長（2年）、不浪費等諸多優點，對HIV-Ab檢測標本zui少、不具備ELISA測定條件的偏遠地區中、小型檢驗科也尤為適用。